文档介绍：胡萝卜素和叶黄素的提取方法
分光光度法
A 装置
色谱柱
,长30cm的硬质玻璃管,下端内径2mm,长约10cm的毛细管伸到25ml容量瓶的颈部。
真空过滤装置
用于收集洗脱液于容量瓶内。该装置经橡皮塞与色谱柱相连。
B 试剂
***
无水,不含醇。在约10目锌粒存在下蒸馏得到。
已烷
市售品。
提取剂
已烷-***-无水乙醇-甲苯(10+7+6+7)。
吸附剂Ⅰ
硅胶G和硅藻土按1+1(w/w)于机械混料机中混合1-2h。
吸附剂Ⅱ
活性氧化镁和硅藻土按1+1(w/w)于机械混料机中混合1-2h。
氢氧化钾甲醇溶液
40%溶解40g氢氧化钾于甲醇中,冷却后用甲醇稀释至100ml。
硫酸钠溶液
10%。溶解10g无水硫酸钠于100ml水中。
洗脱液
胡萝卜素-已烷-***(96+4)溶液。
一羟基色素〔MHP〕-已烷***(90+10)溶液。
二羟基色素〔DHP〕-已烷-***〔80+20)溶液。
总叶黄色〔TX〕-已烷-***-甲醇(80+10+10)溶液。
1-苯偶氮基-2-萘酚(;苏丹I)标准溶液
贮备液
。用热无水乙醇重结晶标准品,并在70℃真空干燥箱中干燥至恒重。***-异丙醇(1+1)中。
工作液
。用***-异丙醇(1+1)稀释20ml贮备液至500ml,在暗处保存。
C 样品制备
将样品磨碎,过40目筛。准确称取适量样品〔2g玉米麸质或苜蓿粉;50mg金盏花粉;4g混合饲料〕于100ml容量瓶中,用移液管加入30ml提取液,密塞,旋转振摇1min。对于湿度较低的样品,如金盏花,脱水苜蓿或玉米麸质〔未经空气干燥〕,以
1ml水/2g样品的比例加水到烧瓶中,密塞,旋转振摇1min。对于高湿度〔经空气干燥〕样品,可省去加水。
热皂化
〔用于快速提取和含叶黄素酯的样品〕。用移液管加2ml〔4g混合饲料加4ml〕40%的氢氧化钾甲醇液至烧瓶中,旋转振摇1min,然后将烧瓶置于56℃水浴上加热20min,接上空气冷凝管或冷却烧瓶颈部,以防止溶剂损失。冷却样品,于暗处放置1h。吸取30ml已烷至烧瓶中,旋转振摇1min,用10%Na2SO4溶液稀释至刻度,剧烈振摇1min。色谱分离前于暗处放置1h。上层液体积为50ml。
冷却〔过夜〕皂化
〔用于快速提取和含叶黄素酯的样品〕。用移液管加2ml〔4g混合饲料加4ml〕40%的氢氧化钾甲醇液至烧瓶中,旋转振摇1min,然后将烧瓶置于56℃水浴上加热20min,接上空气冷凝管或冷却烧瓶颈部,以防止溶剂损失。冷却样品,于暗处放置1h。吸取30ml已烷至烧瓶中,旋转振摇1min,用10%Na2SO4溶液稀释至刻度,剧烈振摇1min。色谱分离前于暗处放置1h。上层液体积为50ml。
D 色谱法
将色谱柱置于过滤器上,并于其底部塞入少许脱脂棉或玻璃棉。装入约12cm高的吸附剂Ⅰ,抽真空,补加吸附剂