文档介绍：超氧化物歧化酶(SOD)过氧化物酶(CAT)苯丙氨酸解氨酶(PAL)实验测定方法总结
超氧化物歧化酶(SOD)活性测定-----氮蓝四唑(NBT)法
依据测定的蛋白含量计算出不同品种葡萄所需的酶液量(mL),并按照表2顺序加入试剂,注意核黄素要最后加入,共做6管。
表2 NBT法测定SOD酶活性
50mM pH 130mM
750μM 100μM
蒸馏酶粗提20μM
液(mL) 核黄素
溶液(mL)

0 0

(mL)
磷甲硫氨氮蓝四EDTA-Na2 水
酸缓冲酸溶液唑溶液(mL) 液(mL) (mL) (mL)
1 2 3 4 5 6

注:1号为不光照对照管,2号为光照对照管
各溶液显色反应用量混合后,将1号管置于黑暗处,其余各管置于光照处,反应约10 min(温度低时,反应时间延长;光照强时,缩短反应时间)。反应结束后,全部移入暗处,以不光照对照管作为空白对照,在560nm处测定吸光度,记录数据。
SOD酶活计算公式:SOD(U/)=(Ack-Ae)/(Ack**C) 式中:C-蛋白含量(mg)
Ack-用缓冲液代替酶液的照光对照管吸光度 Ae-样品管吸光度试剂配制方法:
(1)()。()+ NaH2PO4 ()
(2)130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:。
(3)750μmol/L氮蓝四唑溶液:,避光保存。
(4)100μmol/L EDTA-Na2溶液: EDTA-Na2,用磷酸缓冲液定容至1000ml。(5)20 μmol/L核黄素溶液:,避光保存。
过氧化物酶(CAT)活性测定----紫外吸收法
取6只试管,其中两个为对照管,依据测定的蛋白含量计算出不同品种葡萄所需的酶液量(
mL),并按照表3加入试剂。
表3紫外分光发测定CAT酶活性
1(对照) 2 3 4 5
(mL)

蒸馏水(mL) 1 1 1 1 1
酶粗提液(mL) 0

25℃预热后, 。每加完一管立即计时,并迅速倒入石英比色皿中,在260nm下测定吸光度,每隔2 min读数一次,共测12min,待4个管全部测完。记录数据,计算活性。(u)
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