文档介绍：菠菜色素的提取和色素分离
(Extraction of pigments from spinach and
chromagraphic isolation)
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学会薄层层析法对于有机物进行分离
学会柱层析法对于有机物进行分离
使用紫外光谱对于特定有机物进行分析
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原理:色谱法
叶绿素a(R=CH3) 叶绿素b(R=CHO)
β-胡萝卜素(R=H) 叶黄素(R=OH)
维生素A
相对极性的大小为:叶绿素a 〉叶绿素b 〉叶黄素〉胡萝卜素
由于甲醇的极性在它们之间,正好可以溶解叶黄素而不能溶解其他的三者,因此实际样品中只能洗脱出三个,按照洗脱剂极性从小到大的顺序出来的为胡萝卜素,叶绿素a,叶绿素b。
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名称
分子量
性状
折光率
比重
熔点
沸点
水(S)
醇(S)
醚(S)
甲醇
Col lq
-
∞
∞
∞
***
Col lq
-
∞
∞
∞
乙酸乙酯
Col lq
-
∞
∞
:
硅胶G 中性氧化铝 95%甲醇石油醚(沸程60-90℃) ***乙酸乙酯菠菜叶
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旋转蒸发装置柱色谱装置
柱色谱中的填充物从下至上分别为脱脂棉,石英砂、氧化铝、石英砂。
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实验步骤
现象
,剪碎后用甲醇搅拌均匀,研磨5min,抽滤后,弃去滤液。将液体返回研钵,先用10ml3:2石油醚-甲醇,弃去滤液,后用10ml 3:2的石油醚-甲醇混合溶液萃取一次,留下滤液,每次加以研磨和抽滤。转移产出液,用10ml水水洗两次,弃去水-甲醇层,余物用污水硫酸钠干燥后转移至圆底烧瓶中,旋转蒸发除去大部分石油醚,至体积为1ml左右。
,抽滤后的残渣经过萃取,研磨,抽滤后体积约为20ml,水洗后分层,石油醚层在上,甲醇层在下,舍弃甲醇层,用无水硫酸钠干燥,至粉末状的无水硫酸钠可以自由滑动为止。旋转蒸馏浓缩至1ml左右(色素恰好全部溶解为最佳)。
,取四块载玻片,%羧***纤维素钠制板后,晾干后在110℃下活化1h。展开剂:(a)石油醚-***=8:2(体积比)(b)石油醚-乙酸乙酯=6:4(体积比),取下层析板,点样后,小心加入展开剂的广口瓶中,底部垫以滤纸,盖好瓶盖。待展开剂上升至规定高度时,取出层析板,在空气中晾干,用铅笔作好标记。用不同的展开剂展开。
,粘稠程度合适,经过活化后的薄板为白色固体状。(薄层板制备的好坏直接影响色谱分析的结果)
,在20×10cm的层析柱中,加入15cm高的石油醚,将20g层析用中性氧化铝从漏斗中缓慢加入,小心打开柱下活塞,保持石油醚高度不变。流下的氧化铝在柱子中堆积。必须是用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻的在层析柱周围敲击。柱中的层析面由下端的活塞控制,不能漫溢和干涸。打开活塞