第五章 毕业论文实验步骤.doc

文档介绍：
-GA-BSA抗原的制备

1、;;4℃冰箱保存备用;
2、,获得A、B、C、D、E溶液;
3、分别称取50mg、100mg、200mg、400mg、800mg链霉素,,获得a、b、c、d、e溶液;
4、将Aa、、Dd、Ee混合,%的戊二醛,边加边搅拌。;
5、将加入戊二醛后的五组溶液置于室温下搅拌反应6h;
6、、; NaCl、 KCl、 Na2HPO4· KH2PO4,加双蒸水溶解,定容至1000mL,4℃冰箱保存备用;
7、;
8、透析完后对每组进行SDS-PAGE凝胶电泳,看偶联是否成功;
9、将链霉素,BSA、五个组的偶联抗原用碳酸盐缓冲稀释成一定浓度,用碳酸盐缓冲液作对照,进行紫外扫描;
10、根据紫外扫描结果计算偶联比,确定链霉素与BSA的最佳初始量x。

1、称取五组链霉素与BSA(第一组实验的最佳初始量x)分别溶于碳酸盐缓冲液中,获得A′、B′、C′、D′、E′溶液;
2、、、、、%戊二醛,边加边搅拌,获得a′、b′、c′、d′、e′溶液,将其置于室温下搅拌反应6h;
3、;
4、透析完后对每组进行SDS-PAGE凝胶电泳,看偶联是否成功;
5、将链霉素,BSA、五个组的偶联抗原用碳酸盐缓冲稀释成一定浓度,用碳酸盐缓冲液作对照,进行紫外扫描;
6、根据紫外扫描结果计算偶联比,确定戊二醛的最佳加入量y。

1、称取五组一定质量的链霉素、BSA(第一组实验的最佳初始量x),并将其溶于100mL的碳酸盐缓冲液中;
2、分别向五个组中加入一定量的戊二醛(第二组实验的最佳加入量y),边加边搅拌;
3、将五个组置于室温下,分别搅拌反应2h、4h、6h、8h、10h;
4、待每组反应完后,;
5、透析完后对每组进行SDS-PAGE凝胶电泳,看偶联是否成功;
6、将链霉素,BSA、五个组的偶联抗原用碳酸盐缓冲稀释成一定浓度,用碳酸盐缓冲液作对照,进行紫外扫描;
7、根据紫外扫描结果计算偶联比,确定最佳反应时间t。
-GA-OVA包被原的制备
其方法与SM-GA-BSA抗原的制备相同。
,利用正交法分析出链霉素在用戊二醛合成抗原时的最优条件
1、根据上述三组实验的x,y,t对应分别设置三个变量;
2、对链霉素与戊二醛的初始比变量进行设置,x-1、x、x+1;
3、对戊二醛的量进行设置,y-、y、y+;
4、对偶联时间进行设置,