文档介绍：一、凝集反应
:ABO血型鉴定
:血清效价判定
二、沉淀反应
单向琼脂扩散:血清IgG含量测定
第一次实验课内容回顾
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一、酶联免疫吸附实验(ELISA)—血清AFP含量测定
每次洗板的意义是什么?
设置个对照组的意义是什么?
二、斑点免疫层析实验(DICA)—尿液hCG测定
DICA的实验原理是什么?
尿液hCG含量过高时,为何会出现无效结果?
第二次实验课:免疫标记技术
免疫标记技术 (immunolabeling technique)
用易于识别和检测的标记物如荧光素、同位素、酶或胶体金等标记已知的抗原(或抗体)进行的抗原-抗体反应,用于检测体内外超微量的抗体(或抗原)。
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标记物
标记物质与抗体(或抗原)的化学连接未改变抗体(或抗原)的免疫学特性,同时标记物的性质依然存在,因而极大的提高了反应的敏感性,可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。
Ag
标记物
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炭疽杆菌24h培养物直接荧光抗体检测
抗核抗体直接荧光抗体染色
间接荧光抗体检测细胞培养中的猪瘟病毒
免疫荧光技术
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酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)
免疫标记技术
免疫酶测定技术 (enzyme immunoassay, EIA)
是用酶标记抗体检测抗原的方法。
常用酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)。
EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合,通过酶作用于底物后显色来判定结果。
常用方法:
酶联免疫吸附试验---测定可溶性抗原或抗体
包括:间接法、双抗体夹心法、竞争法等。
酶免疫组化法---测定组织中或细胞表面的抗原。
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甲胎蛋白(AFP)
是一种肿瘤标志物。正常时由卵黄囊及胚胎肝产生,出生一年后维持低水平,肝病时升高,原发性肝癌时明显增高,已作为临床诊断原发性肝癌的常规指标之一。
正常值:≤20ng/ml
原发性肝癌:≥400ng/ml
【试剂与器材】
1. 待检患者血清(患1、患2、患3、患4)
2. 甲胎蛋白阳性血清(阳性):AFP=400ng/ml
3. 甲胎蛋白阴性血清(阴性):AFP ≤20ng/ml
4. 抗甲胎蛋白抗体(包被抗体)
5. HRP标记的抗甲胎蛋白抗体(酶Ab)
6. 碳酸盐缓冲液()
7. 磷酸盐缓冲液(PBS,)
8. 邻苯二***(底物)
9. 聚乙烯塑料反应板
10. 微量加样枪、冰箱、温箱等
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