文档介绍：葡萄花药诱导植株初获成功
果树育种工作普遍存在的问题是结果迟,占地大,很多不能自交,故绝大多数果树皆为
杂合体。因此,进行果树花药培养就具有更大的理论和实践意义。然而,到目前为止,尚未
见到利用花药培养出单倍体果树植株的报导。对于葡萄这一温带广泛栽培的果树,格瑞
霍夫( 曾报导了由栽培葡萄品种花药培养出单倍体愈伤组织;平林等培养野葡
萄花药从中分化出枝,未移栽成活;新关宏夫( 在报告中讲它是一个二倍体;邹昌杰
等报导经过几年转移数千块愈伤组织均未分化成苗。因此,进行葡萄花药培养研究就十
分必要。本文简要地报导我们以葡萄花药诱导出植株并移栽成活的初步结果。
材料和方法
采取花粉处于四分孢子到单核中期的葡萄花序,先在酒精中浸秒钟,再放到
升***溶液中消毒分钟,然后用无菌水冲洗次,取出花药接种于诱导培养基中,放
在温度下培养。月后,将出现的花药愈伤组织转移到分化培养基中培养。
个月后,将出现的白色胚状体转入成苗培养基中,并照光。成苗后移植于花盆中。
基本培养基用(配方附后),每升中另加蔗糖、琼脂,再按不同目的加入
不同成分和浓度的细胞分裂素和生长素。调值至磅灭菌分钟。用
溶液检查花粉发育期。用苏木精染色,根尖压片检查染色体数。
试验结果
花药愈伤组织的诱导
接种的葡萄花药有白哈丽丽、无核白,早维拉、塔那库奇、白苏哈、亚历山大、玫瑰
香、武威紫葡萄及(品种名待查定)等个栽培品种。试验用了两种诱导
培养基:加有的培养基为加入
的为。接种后花药逐渐变褐, 天后花药增大或外翻,表面呈粒状突
起。愈伤组织诱导频率为。
胚状体的分化
将接种天的花药愈伤组织转移到分化培养基中, 个品种花药愈伤组织出现多
少不等,高者达以上。能不能分化成苗才是我们研究的中心问题,为此设计了种分
化培养基(下列数字单位为:分分
; 分分分:无激素;分
抗生长素( 。基本培养基蔗糖降为,其他同前。
分化结果,在各种分化培养基中共转移不同品种、不同类型愈伤组织块,只有
分化出堆胚状体。这堆胚状体都是从培养基上诱导出的花药愈
伤组织上产生的。其中在分分化培养基上产生堆,在分分化培养基上产生堆,
而在原诱导培养基上不转移或转移到其他分化培养基上的个品种全都未能
分化出胚状体。出现的白色胚状体质嫩,着生在胶状的黄褐色愈伤组织上,都呈堆状。这种
胚状体堆不同于任何类型愈伤组织,经显微镜观察,其细胞大小相等、排列整齐,细胞核
大,质浓,类似分生细胞或胚胎细胞,这堆胚状体有堆是在接种后天,转移后
个月出现的。另一堆是在接种后天,转移后个月出现的。前堆中的堆胚状
体在个月中把肉眼可见的胚状体全部转移后,在原瓶原处仍不断产生胚状体,先后转移
次,约多块,这在许多方面不同于平林等报导所见到的那种白色枝条。
胚状体成苗
将胚状体移到不同成苗培养基,在的日光灯下照光天后胚状体增大;
天后尖端发绿,出现子叶和根; 天后发育成苗,成苗结果见下表。
从上表可以看出,胚状体在苗培养基上成苗效果好,增加细胞分裂素和赤霉素
)对成苗不利,共计得到完整小植株株。另外,有叶无根的苗,有根有芽但不
抽茎的苗,无真叶的苗,未分化器官的块。
成苗的小植株,按其子叶形态有单片、双片、多片、盾状和不规则状,以前种形态的
子叶较易长成完整小苗,子叶呈盾状者则极难成苗。最初几片真叶,叶色、叶形变化较大,
其后逐渐发育为正常叶片;茎呈圆形,但在早期也有扁平或扇状茎。
幼苗移栽
当小苗有片正常叶片时,拔出棉塞,无菌加盖小烧杯,增强光照和通气,可促进
幼苗生长。测定结果:去棉塞比不去者生长快,比土壤中快。去棉塞的小苗
长到管口或瓶口时,去小烧杯放在灯光下锻炼天。然后取出小苗,洗去根上附着的培
养基,放在清水中再锻炼天移至加有砂的壤土花盆中,待新叶长出后移至温度低
一些的房中锻炼周,并照射日光。最后再搬入温室,头几天正中午要避免强烈光照。移出
的已成活株,成活率
小植株根尖检查染色体,由于未追踪花粉发育过程,故不能确定小植株来源于
花粉还是体细胞,细胞学、遗传学鉴定工作正在行进之中。从栽培品种葡萄花药诱导出植株
并移栽成活,这还属首次。
讨论
关于倍性问题
花药培养的主要目的是诱导小孢子产生单倍体植株,然而诱导出的植株除了单倍体外,
还有二倍体、多倍体和非整倍体植株。倍性变化,除因植株来自花丝、药壁、药隔组织体细
胞外,花粉植株也会在培养过程中自然加倍,出现二倍体以及多倍体植株。我们的花药小植
株是在加入生长素和细胞分裂素之后经历较长时间分化出的,在这样的条件下,细胞染色体
自然加倍的可能性非常之大。因此,有的小植株有来自花粉的可能性。要证