专题一 基因工程.ppt

文档介绍：第二节
基因工程的基本操作程序
基因工程的基本操作程序
提取目的基因
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测和表达
一、目的基因的获取
哪些可以作为目的基因?
主要是编码蛋白质的,也可以是编码一些具有调控作用的因子
目的基因的获取方法
1、从基因文库中获取
2、利用PCR技术扩增
3、利用化学方法人工合成
1、从基因文库中获取目的基因
基因文库的定义:见课本
基因文库的种类:
基因组文库
部分基因文库(如cDNA文库)
获取的依据:
基因的核苷酸序列、
基因的功能、
基因在染色体上的位置、
基因的转录产物mRNA、
基因的表达产物蛋白质等。
2、利用PCR技术扩增目的基因
PCR含义:生物体外复制特定DN***段的核酸合成技术,全称是多聚酶链式反应。
PCR原理:DNA双链复制
变性:DNA高温完全解开双链
复性:引物与单链DNA碱基互补配
延伸:在热稳定DNA聚合酶作用下,
随着引物向后延伸子链
模板:含目的基因的DN***段
原料:dNTP
酶:热稳定DNA聚合酶
引物:单链DNA
Mg2+(激活剂):激活酶活性
缓冲液:维持PH值
PCR扩增过程:
PCR反应原理示意图
前提:
要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列,以便合成引物。
3、人工合成法
化学合成法
适用范围:基因小且核苷酸序列已知的目的基因
工具:DNA合成仪
逆转录法
适用范围:已知mRNA
过程:
mRNA————RNA-DNA杂交链————单链DNA
——————双链DNA
逆转录酶
核酸酶H
降解RNA
DNA聚合酶
二、基因表达载体的构建
限制酶
DNA连接酶
目的基因
启动子
终止子
标记基因
复制原点
三、将目的基因导入受体细胞
导入植物细胞方法:
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
导入动物细胞方法:显微注射法
导入微生物的方法:Ca2+处理法
1、导入植物细胞的方法
农杆菌转化法