文档介绍：1
第十一章色谱分析法
Principles of Chromatography
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应用举例(GC)
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应用举例(HPLC)
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第一节概述
色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特(Tsweett)分离植物色素时采用。后来不仅用于分离有色物质,还用于分离无色物质,并出现了种类繁多的各种色谱法。许多气体、液体和固体样品都能找到合适的色谱法进行分离和分析。目前色谱法已广泛应用于许多领域,成为十分重要的分离分析手段。
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茨维特的实验
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石油醚
碳酸钙颗粒
色素
玻璃柱
概述
色谱法:利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术
流动相:在管内自上而下连续流动的流体(液体或气体)。
固定相:装填在玻璃管或金属管中固定不动的一相。
色谱柱:装填有固定相的玻璃管或金属管。
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概述
不管属于哪一类色谱法,其共同的基本特点是具备两个相:不动的一相,称一为固定相;另一相是携带样品流过固定相的流动体,称为流动相。当流动相中样品混合物经过固定相时,就会与固定相发生作用,由于各组分在性质和结构上的差异,与固定相相互作用的类型、强弱也有差异,因此在同一推动力的作用下,不同组分在固定相滞留时间长短不同,从而按先后不同的次序从固定相中流出。
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色谱法分类
气相色谱(GC):流动相为气体的色谱法。
根据固定相是固体吸附剂还是固定液(附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体),又可分为气固色谱(GS C)和气液色谱(GLC).
液相色谱(LC):流动相为液体的色谱法。同理,液相色谱亦可分为液固色谱(LSC)和液液色谱(LLC)
超临界流体色谱(SFC):流动相为超临界流体的色谱法。
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色谱法分类
利用组分在吸附剂(固定相)上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法,称为吸附色谱法。
利用组分在固定液(固定相)中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。
利用组分在离子交换剂(固定相)上的亲和力大小不同而达到分离的方法,称为离子交换色谱法。
利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法,称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。
最近,又有一种新分离技术,利用不同组分与固定相(固定化分子)的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法,常用于蛋白质的分离。
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色谱法分析的基本原理
一、分配系数Kp和分配比k
Kp
如前所述,分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配过程,而吸附色谱的分离是基于反复多次地吸附一脱附过程。这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述,而描述这种分配的参数称为分配系数。它是指在一定温度和压力下,组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值,即