文档介绍：HPLC基础理论及使用注意事项
第一部分色谱基础理论回顾
第二部分 HPLC硬件基础知识及各部件使用
注意事项
第三部分 HPLC使用过程中常遇见的问题及
处理方法
第一部分色谱基础理论回顾
1903年俄国植物化学家茨维特(Tswett)首次提出“色谱法”(Chromotography)。
30年代,。相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。     1952年,英国学者Martin和Synge 提出了气相色谱法,精辟阐述了气相色谱完整的理论和方法,使色谱从最初的定性分离手段进一步演化为具有分离功能的定量测定手段。1958年,出现毛细管气相色谱;60年代,推出了GC-MS。     1960年中后期,生物技术飞速发展,为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质,在气相色谱理论和实践的发展的基础上,以及机械、光学、电子等技术上的进步,液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。1970年中期以后,微处理机技术用于液相色谱,进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。
20世纪80年代是色谱技术蓬勃发展的时期,出现各种联用技术。
     20世纪80年代以后,毛细管电泳技术。20世纪90年代以来,以毛细管电泳为基础的微分析芯片又将分析科学带入一个全新的领域。
90年代-毛细管电泳电色谱
色谱的发展历史
色带
(色谱)
色谱法是一种分离技术
检测器
固定相
色谱柱
流动相
试样
A+B
B
A
B
A
B
A
B
A
B
S
t0 t1 t2 t3 t4
色谱过程—多次吸附→解吸→再吸附→再解吸(“分配”过程)
A、B性质和结构上的微小差异→吸附能力和溶解能力有微小差异→差异累积→先后出峰
色谱是一种分离技术.
色谱的主要目的是对混合物中的
目标物分离和定量
色谱基本参数
基线
拖尾因子(不对称因子)
保留体积、死体积、调整保留体积
保留时间、死时间、调整保留时间
峰高(峰面积)
峰宽
分离度
分配系数
容量因子(保留因子)
一、分离原理
吸附色谱-分子
分配色谱-分子
离子交换色谱-阴阳离子
分子排阻色谱-高分子物质
HPLC的分类
二、按实际应用情况
化学键合相色谱
离子抑制色谱
离子对色谱
手性色谱法
亲和色谱法
电色谱法
胶束色谱法
组织提取物、多肽、
蛋白质、核酸
硅氧烷Si-O-Si-C
化学键合相色谱
R2=(CH2)3NH2(氨基柱)
=(CH2)3CN(***基柱)
=(CH2)2OCH2CH(OH)CH2OH(二羟基柱)
=(CH2)17CH3(C18柱)
=(CH2)7CH3(C8柱)
=(CH2)3C6H3(苯基柱)
流动相极性<固定相极性
流动相极性>固定相极性
反相键合相色谱法
正相键合相色谱法
化学键合相色谱
反相离子对色谱法