文档介绍：张世春
分光光度法
:分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。
:(1)200~380nm的紫外光区,(2)380~780nm的可见光区,(3)~25μm的红外光区。
、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
一、分光光度法基础知识
主要部件:光源、分光系统(单色器)、吸收池(比色皿)、检测系统。
,所有仪器应按照国家计量检定规程,定期进行校正检定。
1)检查仪器各调节钮的起始位置是否正确,接通电源开关,打开样品室暗箱盖,使电表指针处于“0”位,预热20min后,再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档,用调“0”电位器调整电表为T=0%。
,推动试样架拉手,使参比溶液池(溶液装入4/5高度,置第一格)置于光路上,调节100%透射比调节器,使电表指针指T=100%。
,调0,盖上样品室盖,调透射比为100%的操作至仪器稳定。
,推动试样架拉手,使样品溶液池置于光路上,读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。
,取出比色皿,洗净后倒置于滤纸上晾干。各旋钮置于原来位置,电源开关置于“关”,拔下电源插头。
:“l”×1倍;“2”×10倍;“3”×20倍,灵敏度依次增大。由于单色光波长不同时,光能量不同,需选不同的灵敏度档。选择原则是在能使参比溶液调到T= 100%处时,尽量使用灵敏度较低的档,以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后,应重新调“0”和“100”。
1)了解仪器的结构和工作原理,以及各个操作旋钮的功能。在未接通电源之前,应该对于仪器的安全性进行检查。 2)仪器在使用前先检查一下,放大器及单色器的二个硅胶干燥筒(在仪器底部),如受潮变色,应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶烘干后再用。 3)在仪器尚未接通电源时,各个调节旋钮的起始位置应该正确。电表的指针必须位于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。 4)仪器经过运输和搬运等原因,会影响波长准确度,请根据仪器调校步骤进行调整,   然后投入使用。 5)选择合适的灵敏度档。 6)如果大幅度改变测试波长时,在调整透光率“0”和“100%”后稍等片刻,(钨灯在急剧改变亮度后需要一段热平衡时间),待指针稳定后重新调整透光率“0”和“100%”即可工作。 7)仪器工作不正常时,如无输入,光源灯不亮、电表指针不动,应首先检查保险丝有否损坏,然后检查电路。 8)当仪器停止工作时,必须切断电源,开关放在“关”。 9)比色皿保持干净,注意擦拭过程手拿不光滑那面。
-----分光光度法遵循规律
1)内容
当一束单色光通过一均匀的有色溶液时,溶液的吸光度与溶液的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,即朗伯-比尔定律,其关系式:
式中:A---吸光度; ---吸收系数;c---液层厚度
结论:吸收系数越大,表示光质点对某波长的光吸收能力越强,光度测定的灵敏度越高,它主要与吸收光的波长范围有关。
2)适用范围
①只适用于单色光;
②只适用于稀溶液,浓度较高时偏离光吸收定律;
③适用于透明溶液,不能用于乳浊液和悬浮液;
④适用于彼此不相互作用的多组分溶液,它们的吸光度具有加和性。
二、分光光度法测量条件的选择
:选择最大吸收波长的入射光,如果有干扰时,则选用灵敏度较低但能避免干扰的入射光。
:-,测量准确度较高。这就要求从试样的称样量、稀释倍数或改变吸收池的厚度来调节吸光度的大小。
1)当试液、试剂、显色剂均为无色时,用蒸馏水做参比液;
2)当试剂、显色剂均为无色时,试液中有其它离子有色时,应采用不加显色剂的试液做参比液;
3)试液和显色剂均有色,可将一份试液加掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,再加入其它试剂和显色剂,以此溶液作参比,可以消除共存组分的干扰。
在光度分析中,将试样中被测组分转变成有色化合物的化学反应叫显色反应。
1)显色剂的用量
2)溶液的酸度
3)显色时间
4)温度
5)溶剂的影响
6)干扰离子的影响