文档介绍：第八章血清酶活性测定
第一节概述
血浆特异酶:在血浆中发挥特定的催化作用的酶。为血浆蛋白的固有成分,含量高于其他组织,与凝血有关的酶或酶原、拟胆碱酯酶、脂蛋白脂肪酶及肾素等。
外分泌酶:由外分泌腺合成并分泌进入血浆的酶。如:淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶
细胞内酶:存在于细胞内进行物质代谢的酶,随着细胞的不断更新或破坏可少量释入血液,细胞内外浓度差异悬殊,当其大量出现于血清中时,提示酶的来源组织细胞受损,最常用于临床诊断。
一、血清酶的来源
二、酶活性测定在临床诊断中的应用
(一)在诊断肝胆疾病中的应用
反映肝细胞实质病变:ALT 、AST
反映肝细胞合成功能:ChE 、LCAT
(二)在诊断急性心肌梗死中的应用
CK-MB ,LDH1 ,AST
(三)在诊断急性胰腺炎中的应用
ALP(碱性磷酸酶)
(四)在诊断骨骼疾病中的应用
AMS(淀粉酶),LPS(脂肪酶)
(五)在诊断前列腺疾病中的应用
同工酶
(六)在诊断肿瘤中的应用
ACP(酸性磷酸酶)
第二节血清氨基转移酶活性测定
氨基转移酶又称转氨酶,在机体内多达60余种,广泛存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。
其中以丙氨酸氨基转移酶(ALT或GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST或GOT)两种最为重要,它们催化机体内氨基酸的转氨基反应:
ALT
L-丙氨酸+ α-***戊二酸↔***酸+ L-谷氨酸
AST
L-天门冬氨酸+ α-***戊二酸↔草酰乙酸+ L-谷氨酸
A-NH2+B A+B-NH2
转氨酶
COOH
|
(CH2)2
|
HC-NH2
|
COOH
COOH
|
(CH2)2
|
HC-NH2
|
COOH
COOH
|
(CH2)2
|
C=O
|
COOH
COOH
|
(CH2)2
|
C=O
|
COOH
CH3
|
C=O
|
COOH
CH3
|
HC-NH2
|
COOH
COOH
|
CH2
|
C=O
|
COOH
COOH
|
CH2
|
C -NH2
|
COOH
ALT / B6 ~P
AST / B6 ~P
谷氨酸
-***戊二酸
谷氨酸
-***戊二酸
***酸
丙氨酸
草酰乙酸
天冬氨酸
转氨基作用
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(一)定时比色法(两点法)
国内采用的比色测定法有三种:
赖氏法(30min)
金氏法(60min)
改良穆氏法(30min)
三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度
都相似,单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
赖氏比色法
原理:
选择在500-520nm处检测,***酸苯腙的显色强度约为α-***戊二酸苯腙的3倍
必须降低底物α-***戊二酸及2,4-二硝基苯肼的浓度
ALT测定不是
在最佳条件下进行,反应中***酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系
(这是赖氏法的最大缺陷),其标准曲线不呈直线而为抛物线。
2,4-二硝基苯肼
***酸苯腙
(在碱性条件下呈红棕色)
α-***戊二酸苯腙
(在碱性条件下呈红棕色)
丙氨酸+α-***戊二酸***酸+ 谷氨酸
ALT
37°
[测定方法]
二、速率法(连续监测法)
原理
NADH在340nm处有特征吸收峰,连续监测NADH消耗引起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率(-△A/min)计算ALT活性
参考方法