文档介绍：基因工程
第三章基因工程的基本条件
第三章基因工程的基本条件
三用于基因转移的受体菌或细胞
二用于基因克隆的载体
一用于核酸操作的工具酶
一用于核酸操作的工具酶
工具酶:在生物技术中用于DNA和RNA分子的切割,连接,聚合、反转录等有关操作的各种酶的统称为工具酶。
一用于核酸操作的工具酶
1、限制性核酸内切酶
2、DNA连接酶
3、DNA聚合酶
4、核酸酶
5、核酸修饰酶
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1、核酸内切酶
是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。主要从原核生物中分离和纯化出来的。
据1994年《分子生物学百科全书》统计,仅II型核酸内切酶就有2300种以上,可识别230种不同的DNA序列。
限制酶的发现导致重组DNA技术的发展---大自然赐给基因工程学家的一件了不起的礼物。
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修饰的λ(B)
10-4(限制作用)
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10-4 (限制作用)
修饰的λ(K)
大肠杆菌寄主控制的限制与修饰体系
(数字表示λ噬菌体的成斑率(.),表示限制程度. 噬菌体在大肠杆菌K或B菌株上生长,即λ(K)或λ(B)
大肠杆菌K
大肠杆菌B
限制性核酸内切酶的发现
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由宿主控制的限制与修饰作用
由修饰***转移酶和限制性核酸内切酶两种酶活性配合进行的
5’-------------------GAATTC --------------------3’
3’-------------------CTTAAG---------------------5’
EcoRI MEcoRI
限制作用修饰作用
↓↓
Me
---G3’ 5’AATTC----3’ 5’-----GAA TTC-------5’
---CTTAA5’ 3’G----5’ 3’-----CTT AAG------3’
EcoRI Me
图3-2 EcoRI与MEcoRI的限制与修饰作用机理
+
限制性核酸内切酶
(一)寄主控制的限制与修饰系统的生物功能:
保护自身DNA不受限制;破坏外源DNA使之迅速降解。
hsd R:编码限制性核酸内切酶
hsd M:编码限制性***化酶
hsd S:编码限制性酶和***化酶的协同表达
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1970年,Smith等人首先从流感嗜血杆菌Rd株中分离出 Hind II和Hind III
限制性核酸内切酶的功能:主要存在于原核细菌中,识别双链DNA分子中的特定序列,并切割DNA双链,帮助细菌限制外来DNA的入侵。