文档介绍：微生物菌种保藏技术
2011级微生物学
刘艳敏
菌种是进行微生物学研究和应用的基本材料,是发展生物工程的重要基础条件之一,是国家的重要生物资源。
微生物个体微小,代谢活跃,生长繁殖快,如果保存不妥容易发生变异,或被其他微生物污染,甚至导致微生物死亡,这种现象屡见不鲜。
菌种的长期保藏对任何微生物学工作者都是很重要的,而且也是非常必要的。
菌种保藏要求各保藏管理中心所保藏的菌种,必须具有该菌种的详细历史及有关实验资料。并对其所负责保藏的菌种均应采取妥善、可靠的方法保藏,避免菌种的污染或死亡。
微生物菌种保藏
基本原理是在挑选优良纯培养物并使新陈代谢处于最低或几乎停止的状态,即使其处于休眠状态基础上,人为地创造一个有利于休眠的环境,使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。
基本措施是低温、真空、干燥。
常用保藏方法
定期移植法
液体石蜡法
真空冷冻干燥法
-80℃低温冻结法
液氮超低温冻结法
(一)定期移植法
亦称传代培养保藏法,指将菌种接种于适宜的斜面培养基上,最适条件下培养,待得到健壮的菌体后,于4~6℃进行保存并间隔一定时间(3-6个月)进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。
操作步骤:
斜面制备接种培养保藏
斜面制备
培养基配制
分装
灭菌
摆放斜面
培养:
细菌37 ℃,1-2d
酵母28~30℃,2~3d
丝状真菌26 ℃,5~7d
保藏:
4~6℃,保藏3~6个月。
方法总结
操作简单,使用方便;
对设备和人员要求不高;
可随时使用,便于观察菌种;
工作劳动强度大,属短期保藏,保藏成本高;
菌种传代频繁,易退化、污染。