文档介绍：高压蒸汽灭菌锅的使用方法
1、器材
牛肉膏蛋白胨培养基,培养皿(6套一包),手提式高压蒸汽菌锅等。
2、操作步骤
,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。
,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。本实验用 ,℃,20分钟灭菌。
,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。
37℃温箱培养24小时,经检查若无杂菌生长,即可待用。
稀释倒平板法
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …),然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。
倒平板的两种方法
持皿法
⑴将若干无菌培养皿叠放在左侧,便于拿取。
⑵点燃煤气灯,将火焰调到适中(空气不要太大,以免气流过急)。
⑶倒平板时,先用左手握住三角瓶的底部,倾斜三角瓶,用右手旋松棉塞,然后用右手的小指和手掌边缘夹住棉塞并将它拔出(切勿将棉塞放在桌面上),随之将瓶口周缘在火焰上过一下(不可灼烧,以防爆裂,以杀死可指沾在瓶口外的杂菌。然后将三角瓶从左手传至右手中(用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部),在这操