文档介绍：实验九卵磷脂的提取、纯化和鉴定
1、学****和掌握卵磷脂的提取和鉴定方法;
2、掌握薄层层析的原理、方法和应用。
一、实验目的
是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。
卵磷脂又称磷脂酰胆碱,是甘油磷脂的一种。在动植物体内均有分布,在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和卵细胞中含量较多,蛋黄中含量可达8-10%。
其结构式为:
胆碱
HO
磷脂易溶于***、苯、***仿,部分溶于乙醇,极难溶于***;卵磷脂溶于乙醇、甲醇、***仿等有机溶剂,但不溶于***;***能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。
因此,本实验用乙醇、***为溶剂,***为沉淀剂,干燥后获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物,与空气接触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈黄褐色。卵磷脂中的胆碱,在碱性溶液中可分解为三甲***,而具有特异的鱼腥味,可用于鉴定。
二、实验原理 (一)卵磷脂的提取和纯化
物质提取、纯化受到多种因素的影响,如抽提物的种类及其配比、抽提条件(温度、时间等)都能影响提取的结果。这种多因素的试验可以通过正交法,即用一特制的表格—正交表来安排试验,计算和分析试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。
本实验运用正交法抽提物的种类及其配比、时间温度和料液比这4个因素对卵磷脂提取和纯化的影响,并求得在什么样的条件下可以达到最佳的试验效果。
正交法实验设计
水平
影响因素
[乙醇]∶[***]
温度
时间(min)
料液比
1
5∶1
4℃
10
1∶4
2
4∶1
25℃
20
1∶5
3
3∶1
60℃
30
1∶6
表1 抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平
表3 L9 表
按一般方法,如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑,共需做3*3*3*3=81次试验,而用正交表只需做9次试验,即选用L9表(L是正交表的代号,下标数字表示试验次数)。
(二)薄层层析
薄层层析(TLC)是一种微量而快速的层析方法。其层析是在吸附剂(固相支持物)均匀涂布的的薄层上进行的,故称薄层层析。而待分析的样品,是点加到薄层板的一端,然后将该端浸入适宜的展层剂中,在密闭的层析缸中展层。
由于各种物质的结构和性质的不同,其在吸附剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸附,而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被吸附剂吸附,而易被展层剂携带至较远的距离。这样,各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附,就表现出不同的迁移率而得以分离,并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。