文档介绍：薄层色谱及柱色谱
刘雪丽刘菲
李喜梅钟家吉
薄层色谱及柱色谱
一、实验目的
1、掌握色谱法的基本原理及其应用。
2、掌握薄层色谱及柱色谱的操作技能。
二、色谱法基本原理
,是分离,纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。
(流动相和固定相)的吸附或分配(溶解性能)的差异。即当混合物随流动相流经固定相时,由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同,经过两相间反复多次的吸附或分配,使吸附较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动较快,从而使各组分得到分离。
:
(1)分离混合物
(2)精致提纯化合物
(3)鉴定化合物
(4)跟踪反应进程
三、色谱法的分类
(1)薄层色谱:将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上,形成薄层来进行物质分离及分析的方法。
按其操作不同,可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高效液相色谱。
(2)柱色谱:将固定相装在色谱柱中,使样品沿着色谱柱移动,通过各组分随流动相流动而得到分离的方法。
(3)纸色谱:用滤纸等作为液体的载体,将样品点在纸上随后展开而达到分离鉴定的方法。
(4)气相色谱:是以气体为流动相的色谱法。
展开剂选用9:1的无水苯-乙酸乙脂
偶氮苯
苏丹Ⅲ
有关化合物的物理性质:
四、薄层色谱
:
(1)固定相的选择:
吸附色谱: 氧化铝、硅胶(H——不含黏合剂)
分配色谱的支持剂:硅藻土、纤维素(F——含荧光物质)
(G——含煅石膏 2CaSO4·H2O黏合剂)
薄层板的制备
点样
展开
显色,计算、分析
四、薄层色谱
(2)通常将样品溶于低沸点溶剂(***,甲醇、***等),%-5%的溶液,用内径小于1mm管口平整的毛细管,在起始线上小心点样,斑点直径一般不超过2-3mm。
(1)点样前,先在薄层板上据底端1cm处,用尺子、铅笔轻画一横线作为起始线。
(3)同一块板可点几个样品点,但是间距应为1-。点样要轻,不可刺破薄层!(注:因溶液太稀或样点太小,可重复点样。但应在前次点样的溶剂挥发后,方可重点,以防样点被溶解掉。样点过大,造成尾扩散等现象,影响分离效果)
(4)点样结束,必须待样品点干燥后,方可进行展开。
四、薄层色谱
(2)展开操作:
,高度不能超过1cm。待其蒸气饱和,以达到平衡。(约5min)
,先不要接触展开剂,让薄层板吸附蒸气以达饱和。(约3min)
,垫高薄层板,,展开剂高度绝对不能浸过起始线!(展开剂若高于样品点,会使本就少量的样品溶于展开剂,难以随展开剂的展开而分离。达不到分析的目的!)
,就应取出薄层板,待展开剂挥干后,观察分析。绝对不能使展开剂漫过薄层板的端!
(1)展开剂的选择:根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素考虑。