文档介绍：实验十血糖的测定
血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定,~。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定的能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖的丢失。
因此,血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同,大致分三类:氧化还原法,缩合法(主要有邻甲苯***法),酶法(主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法)。下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法
【目的】
1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理,能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶(peroxidase,POD)作用下,分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物,即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下:
【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计
【试剂】
1. ()
,用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸),然后用蒸馏水稀释至1L。
2. 酶试剂
称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L ,加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存,4
℃可稳定3个月。
3. 酚溶液
称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色,可先配成500g/L的溶液,贮存于棕色瓶中,用时稀释),用棕色瓶贮存。
4. 酶酚混合试剂
取上述酶试剂与酚溶液等量混合,4℃可以存放一个月。
5. 12mmol/L苯甲酸溶液
,加温助溶,冷却后加蒸馏水至1L。
(100mmol/L)
,溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中,并移入100ml容量瓶内,再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。
(5mmol/L)
于100ml 容量瓶中,加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。
【操作】
取3 支试管,编号,按下表操作。
表3-12 血糖测定操作步骤
加入物(ml)
空白管
标准管
测定管
血清
-
-
葡萄糖标准液
-
-
蒸馏水
-
-
酶酚混合液
混匀,置 37 ℃水浴中保温 15分钟,在波长 505nm 处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
测定管吸光度
血糖(mmol/L)= ×5
  标准管吸光度
【注意事项】