文档介绍：微生物实验报告
产青霉素酶杆菌的分离、优化、诱导及酶活测定
一
二
三
四
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目录
实验结果
实验操作
分析讨论
简介
一、简介
枯草芽孢杆菌广泛分布于土壤及***的有机物中,易在枯草津汁中繁殖而得名。本实验中通过从土样中获得枯草芽孢杆菌。
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。~×2~3微米,着色均匀。无荚膜,周生鞭毛,能运动。革兰氏阳性菌,~×~,椭圆到柱状,位于菌体中央或稍偏,芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明,污白色或微黄色,在液体培养基中生长时,常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉,分解色氨酸形成吲哚。
枯草芽孢杆菌可产生青霉素酶,并且青霉素和磷酸盐对其有诱导作用,本实验中通过青霉素对其诱导,从而进行菌种的优化。
一、简介
青霉素酶是β-内酰***酶的1种,其作用机理是水解β-内酰***类抗生素的β-内酰***环,使抗生素失去其活性,是致病菌产生耐药性的重要原因之一,因此对青霉素酶的研究在青霉素用于临床不久便全面展开了。
人们在研究青霉素酶的过程中,除了发现它的有害一面外,也发现了一些有利的方面。如:在β-内酰***类抗生素药品的质量检验中,利用青霉素酶进行无菌检查是一种非常有效、简便、快捷的方法,可定量检验出青霉素类药品中污染微生物的程度。因此研究青霉素酶有了另一番意义。
青霉素作诱导剂使用,细胞上特殊接受体与青霉素结合成分( penici l l i n ponent , PBC) 相似,可用青霉素结合成分与诱导剂的“亲和力”不同来解释青霉素酶产率的高低。PBC与诱导剂相结合是青霉素酶合成过程中很重要的影响因素之一。
二、实验过程
如图为大致的操作过程
二、实验过程
实验日程
4月8日青霉素浓度梯度平板的制备,斜面培养基的配制,灭菌。
4月9日采集土壤样品及土壤样品的处理,将所得的实验所用菌液用平面
涂布法接种到做好的培养皿上,放入37℃恒温培养箱培养24h。
4月15日镜检。挑取杆菌接种到10单位的梯度培养基上。
4月22-5月5日优化菌种。增加青霉素素浓度度从10、20、50、100、500、
1000、 2000、 5000、 10000、 20000单位进行重复优化,
增加枯草芽孢杆菌的产酶能力,并将10000万单位的菌种进行
斜面保存。
5月6日-13日摇瓶发酵。对上面得到的10000单位的菌种进行发酵培养,并
对发酵液稀释后进行酶活测定。
5月13日-17日菌株诱变
5月20日将一万单位的保存菌种放入1000、 2000、 4000、 8000、
10000单位的青霉素液体培养基中进行培养并观察菌种生长状况
二、实验过程
细菌培养基:蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
***化钠 4g
蒸馏水 1000mL(若为固体培养基,加20g琼脂),
斜面培养基:蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
***化钠 4g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL,
二、实验过程
发酵培养基: 蛋白胨 15g
甘油 50g
***化钠 4g
%硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)溶液
枸橼酸钠
20%硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶液 1ml
磷酸氢二钾 4g
肉浸液 1000ml
对于上面的3种培养基,为了适宜枯草芽孢杆菌的生长和产酶,进行pH的调节。~(由于灭菌后不好调pH,~,)
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二、实验过程
从土壤中分离菌种并接种培养
涂布培养
青霉素浓度梯度平板的制备
青霉素溶液的制备
处理土样,获得菌液