文档介绍：第五章基因扩增
PCR技术简史
PCR的原理
PCR的反应体系和方法
PCR的类型和应用
基因扩增-PCR
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
解旋酶
解链酶
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
基因扩增-PCR
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
引物酶
引物酶
RNA引物
RNA引物
基因扩增-PCR
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
TAGCGCTATCGCATCGACGCT
3’
ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG
3’
DNA
聚合酶
DNA
聚合酶
基因扩增-PCR
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1971年,Khorana提出:经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。
但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了……
基因扩增-PCR
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1985年,美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应(PCR)
基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制
最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR,由于该酶不耐热,使这一过程耗时,费力,且易出错
耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行,随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪
1993年,Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖
基因扩增-PCR
DNA聚合酶
引物
引物
M13噬菌体
Sanger的测序技术
引物
DNA聚合酶
基因扩增-PCR
引物
引物
Mullis的构思
DNA聚合酶
DNA聚合酶
特定DN***段
基因扩增-PCR
基因组DNA
获取特定DN***段
扩增特定DN***段
基因扩增-PCR