文档介绍：实验十二酶联免疫吸附试验(ELISA)
目的要求
(间接法)的操作方法
原理在合适的载体上,酶标记抗体或抗原与相应的抗原或抗体形成酶标记的抗原—抗体免疫复合物;在一定的底物参与下,免疫复合物上的酶催化底物使其水解,氧化或还原成另一种带色物质,由于在一定条件下,酶的降解底物和呈现色泽是成正比的,因而可以通过比色测定,进而计算出参与反应的抗原或抗体的含量。
ELISA方法发展很快,每年都有新的创造和改进,ELISA类型也很多,但操作方法都大体相似。本实验以经典的ELISA间接法测定猪旋毛虫抗体为例,说明ELISA的基本操作方法和原理。
操作步骤
一、材料准备
(一)器材聚苯乙烯40孔平底反应板、加样器、滴管、滤纸、微量混合器、酶标分光光度计等。
(二)试剂
1. 包被液(CB, )
Na2CO3
NaHCO3
蒸馏水加至 1000ml
2. 稀释液(PBS, )
A液( Na2HPO4溶液) 72ml
B液( NaH2PO4溶液) 28ml
NaCl 18g
加蒸馏水至 2000ml
注:A液配制: Na2HPO4·12H2O溶解在1000ml蒸馏水。
B液配制: NaH2PO4溶解在1000ml蒸馏水
3. 洗涤液(PBST, %吐温PBS,)
A液()
B液( NaH2PO4)
吐温(Tween-20)
NaCl
加蒸馏水至 1000ml
该液4℃冰箱保存备用。
4. 底物溶液(临用时配制,棕色瓶避光保存)。
邻苯二*** 40mg
NaH2PO4
2%无水柠檬酸液
37%H2O2
蒸馏水加至 100ml
5. 终止液(2M H2SO4)
(注意应是硫酸滴入水中)。
6. 酶标抗体兔抗猪IgG辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体或酶标葡萄球菌A蛋白(酶标
SPA),自制或购买。
7. 标准抗原自制或购买。
8. 标准阴、阳性血清自制或购买。
9. 检样采集的猪血清。
二、操作步骤
(一)(购买者,按说明书;自制者