文档介绍：该【食品安全地方标准蔬菜中阿维菌素残留的测定酶联免疫吸附法 】是由【蓝天】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【食品安全地方标准蔬菜中阿维菌素残留的测定酶联免疫吸附法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。食品安全地方标准
蔬菜中阿维菌素残留的测定酶联免疫吸附法
1范围
本标准规定了蔬菜中阿维菌素残留量的酶联免疫吸附测定法。
本标准适用于蔬菜中阿维菌素残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
采用直接竞争酶联免疫吸附（ELISA）方法，在微孔条上包被偶联抗原，试样中残留的阿维菌素与 酶标板上的偶联抗原竞争酶标记的阿维菌素抗体后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪在450nm 处测定吸光度，吸光值与阿维菌素残留量呈负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可 得出阿维菌素残留含量。
4试剂和材料
96孔板（12条x8孔）包被有阿维菌素偶联抗原。
（至少有5个倍比稀释浓度水平，外加1个空白）。
4. 。
。
4. ：过氧化尿素。
：四甲基联苯胺。
4. :1 mol/L硫酸。
（2倍浓缩液）。
4. （20倍浓缩液）。
（分析纯）
GB/T 6682规定的一级水。
用水将2倍的浓缩复溶液按1 ： 1体积比进行稀释（1份2倍浓缩复溶液+1份水），用于溶解干燥 的残留物及稀释试样，复溶液工作液在4°C可保存一个月。
用水将20倍的浓缩洗涤液按1 ： 19体积比进行稀释（1份20倍浓缩洗涤液+19份水），用于酶标板的 洗涤，洗涤液工作液在4°C可保存一个月。
5仪器
5. 1酶标仪
配有450 nm滤光片。
go
转速 N3000r/min。
5. 7怛温箱
单道 20 nL~200 |1L> 100 pL~1000 gL 可调，多道 250 pLo
6试样制备与保存
取蔬菜样品，剪碎，10000r/min均质1 min。制备好的试样，应即刻进行提取和检测。
7试样测定
7. 1提取
g± g于50 mL聚苯乙烯离心管中，加10mL甲醇，涡动5 min, 3000 r/min以上, 20〜25°C离心5 min,取上层澄清液ImL于10 mL洁净干燥的玻璃试管中，于50〜60°C水浴氮气流下吹干, 加入lOOpL甲醇，涡动30s,再加入900|iL复溶工作液，涡动1 min,充分混合，取50应用于分析。
使用前将试剂盒在20-25°CT放置1〜2 h»
7. (至少按双平行实验计算)所有数量的孔条插入微孔架，记录标准和试样的 位置。
7. 2. 2加100 gL系列标准溶液()或处理好的试样溶液到各自的微孔中。标准和试样至少做 两个平行试验。
7. () 100 pL到每一个微孔中，充分混合，于25°C 恒温箱中孵育30 min。
7. 2. 4倒出孔中液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用250 ML洗涤 液工作液充入孔中，再次倒掉微孔中的液体，再重复操作两遍以上(或用洗板机洗涤)。
7. (1L底物显色溶液A液()和50 pL底物显色溶液B液(),混合并在25°C 恒温箱避光显色15 min。
7. (),轻轻振荡混匀，用酶标仪在450 nm处测量吸光度值。
8结果计算
用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值与空白溶液吸光度值的比值进行计算，见式(1):
式中：
Ar——相对吸光度值，%;
B—— 标准（试样）溶液的吸光度值；
%——空白（浓度为0的标准溶液）的吸光度值。
将计算的相对吸光度值（%）对应阿维菌素（ng/L）的自然对数做半对数坐标系统曲线图，对应的 试样浓度可从校正曲线算出，见式（2）:
mx 1000
式中：
X 试样中阿维菌素的含量，单位为微克每千克（|ig/kg）；
A——试样中相对吸光度值（%）对应的阿维菌素含量，单位为微克每升（ng/L）； f——试样稀释倍数；
/«——试样的取样量，单位为克（g）。
计算结果表示到小数点后两位。阳性结果应用确证法确证。
9检测限、准确度和精密度
9. 1检测限
本标准的方法检测限：阿维菌素在蔬菜中的检测限均为10|ig/kg。
在试样中添加10ng/kg~200ng/kg浓度水平的三哩磷时，回收率为70%~110%»
本方法的批内变异系数W15%,批间变异系数＜20%»