第六章 蛋白质定量和定性分析［精选PPT］.ppt

文档介绍：第六章蛋白质定量和定性分析
(Qualitative and quantitative analysis of protein)
第一节蛋白质含量测定
第二节蛋白质分子量的测定
第三节蛋白质纯度分析
第四节糖蛋白中糖含量分析
第五节蛋白质序列分析
第六节生物质谱技术与蛋白质鉴定
本章内容
第一节蛋白质含量测定
微量凯氏定氮法
Folin-酚试剂法
紫外光吸收法
考马斯亮蓝法
目前常用的有四种古老的经典方法:定氮法,双缩脲法(Biuret法),Folin-酚试剂法(Lowry 法),考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度高,比紫外吸收法高10-20倍,比 Biuret 法高100倍以上。凯氏定氮法比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
一、微量凯氏定氮法
蛋白质的主要组成元素C,H,O,N,S,各种蛋白质中含氮量恒定在13%-19%,平均为16%。每100克蛋白质中含氮约为16克。而且生物组织中的氮主要存在于蛋白质中,因此测定生物组织中的氮含量可计算出蛋白质含量。
蛋白质含量= 含氮量×
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数计算出蛋白质含量。
一、原理
3. 再用已知浓度的HCl标准溶液滴定,根据HCl消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量。
(NH4)3BO3 + 3HCl→3NH4Cl + H3BO3
实验试剂与仪器
实验试剂
浓硫酸
硫酸钾(提高沸点)沸点由330℃提高到400℃加速了消化过程。
硫酸铜(催化剂)
NaOH溶液(30%)
硼酸溶液(2%)
盐酸标准溶液( mol/L )
指示剂:溶于95%%溴甲酚绿溶液10ml和溶于95%%***红2ml混合而成。
凯氏定氮装置
自动凯氏定氮仪
(三)、实验步骤
一、消化
   ~1g,置于凯氏烧瓶内,,,在通风橱内的消化炉上加热,先用小火,待水分蒸发完后,,但要瓶内无黑点,有则需要瓶内溶液把它冲洗下去,再加热至澄清为止. 冷却,转入100ml容量瓶中,以少许蒸馏水冲洗烧瓶数次,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,摇匀。