文档介绍：材料:烟草幼苗
正常对照:3盆实验组:3盆*3
一、目的
在逆境条件下(旱、热、冷、冻),植物体内脯氨酸的含量显著增加,植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性,抗旱性强的品种积累的脯氨酸多。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外,由于脯氨酸亲水性极强,能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程,因而能降低冰点,有防止细胞脱水的作用。在低温条件下,植物组织中脯氨酸增加,可提高植物的抗寒性,因此,亦可作为抗寒育种的生理指标。
二、原理
磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应,当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三***加热处理后,茚三***与脯氨酸反应,生成稳定的红色化合物,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
三、材料、仪器及试剂
1. 材料:植物叶片。
2. 仪器:分光光度计;电子分析天平;离心机;小烧杯;普通试管;移液管;注射器;恒温水浴锅;漏斗;漏斗架;滤纸;剪刀;洗耳球。
3 .试剂及配制:
﹪酸性茚三***溶液配制:***溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L-1磷酸中,搅拌加热(70℃)溶解,贮于冰箱中。
3%磺基水杨酸配配制:3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
10μg·ml-1脯氨酸标准母液配制:精确称取20mg脯氨酸,倒入小烧杯内,用少量蒸馏水溶解,再倒入200ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度(为100μg·ml-1脯氨酸母液),再吸取该溶液10ml, 加蒸馏水稀释定容至100ml, 即为10μg·ml-1脯氨酸标准液。
冰醋酸;甲苯。
四、实验步骤
脯氨酸标准曲线的制作
,编号,按下表配制每管含量为0~12μg的脯氨酸标准液。
加入表中试剂后,置于沸水浴中加热30min。取出冷却,各试管再加入4ml甲苯,振荡30秒钟,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。
试剂
管号
0
1
2
3
4
5
10μg·ml-1脯氨酸标准液(ml)
蒸馏水(ml)
冰醋酸(ml)
﹪酸性茚三***(ml)
0
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
每管脯氨酸含量(μg)
0
2
4
6
8
10
,以甲苯溶液为空白对照,在520mm波长处测定吸光度(A)值。
以1~5号管脯氨酸含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
2. 样品的测定
,分别置大试管中,然后向各管分别加入5ml 3%的磺基水杨酸溶液,在沸水浴中提取10min(提取过程中要经常摇动),冷却后过滤于干净的试管中,滤液即为脯氨酸的提取液。
吸取2ml提取液于带玻塞试管中,加入2ml冰醋酸及2ml ﹪酸性茚三***试剂,在沸水浴中加热30min,溶液即呈红色。冷却后加入4ml甲苯,摇荡30秒钟,静置片刻,取上层