文档介绍：1. 说明
. 适用范围:适用于具可变波长紫外检测器的高效液相色谱仪的检定。
. 参照依据:国家技术监督局JJG705-2002“实验室液相色谱仪检定规程”、相关仪器操作说明书及中国药典2005版二部附录VD制定。
. 仪器操作及环境条件:应符合相应仪器的操作及维护规程(SOP)。
2. 检定项目和技术要求
. 泵流量设定值误差应Ss≤±2%;流量稳定性误差应SR≤±2%。
. 柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±℃;℃。
. 波长示值误差应<±2nm; 波长重复性应优于1nm。
. 定性测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤%。
. 定量测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤%。
. 基线漂移应≤5×10-3(Au/h),基线噪声应≤5×10-4Au。
. 最小检测浓度应不超过4×10-8g/ml(萘的甲醇溶液)。
. 梯度误差Gc应不超过±3%(无梯度装置不进行此项检定)。
3. 检定方法
. 泵流量设定值误差Ss,流量稳定性误差SR的检定
. 仪器与用具
50ml
. 操作程序
. 将泵、进样器、色谱柱和检测器连接好,以甲醇为流动相。
. 按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先精密称定过重量的容量瓶收集流动相,同时用秒表记录,准确收集10~25分钟,再精密称定其重量。收集时间
应符合下表规定,每个设定值重复测定3次。
. 结果计算
按下列公式计算SS和SR:
Fm=(W2-W1)/()
SS=(Fm-FS)/FS×100%
SR=(Fmax-Fmin)/F×100%
W2为容量瓶+流动相的重量(g)
W1为容量瓶的重量
P为实验条件下的流动相密度(g/cm3)
t为收集流动相的时间(min)P
Fm流量实测值(ml/min)
FS流量设定值
Fmin同一组测量中流量最小值
Fmax同一组测量中流量最大值
F为同一组测量中流量的算术平均值
. 结果判断:SS和SR值应符合下表规定
流量设定值(ml/min)
测量次数
3
3
3
收集流动相时间(min)
25
15
10
允许误差
SS
3%
2%
2%
SR
3%
2%
2%
. 注意事项:收集时间应将“秒”换算为“分”代入公式计算。
. 柱温箱温度设定值误差ΔTs、柱温箱温度稳定性Tc的检定
. 操作步骤:将温度设为60℃,将一经过校正的温度计放入柱温箱内,每隔10min读取温度计显示温度与柱温箱显示温度一次,共读取7次,求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTs,7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc。
. 结果判断:柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±℃;℃。
. 波长示值误差及波长重复性的检定
. 方法
. 方法一
制备60ug/ml基准***,用一节空管代替色谱柱将进样器与检测器连通,以水做流动相,~,采用步进进样法,即在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处,分别每2min改变1nm,用注射器注入5~10ul(或定量环)标准溶液,重复测量三次。记录色谱图。
. 方法二
制备60ug/ml基准***,按紫外分光光度法,用1cm石英比色皿分别在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处,,测定各波长处60ug/ml基准***,各波长重复测量三次。
. 方法三
对于仪器有波长准确度自检功能的,可利用其自检功能进行检查,重复测量三次。具体详见相关仪器操作说明书。
. 结果计算:
最大(或最小)吸收点对应的波长与标准波长之差即为波长示值误差。
三次测量平均值与三次测量值中最大差值即为波长重复性误差。
. 结果判断:波长示值误差应<±2nm;波长重复性应优于1nm。
. 基线漂移和基线噪声的检定
. 色谱条件:
色谱柱:C18
流动相:甲醇
流速:1ml/min
波长:254nm
. 操作步骤
将仪器各部