文档介绍：2012物技术制药复习提纲
(第2章----第6章)
基本概念
质粒:是存在于细胞染色体之外的双链封闭环状的DNA分子。它含有有别于细胞染色体的独立复制子,能自主地复制自身的DNA。
高密度发酵:是一个相对的概念, 一般指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上,理论上的最高值可达200gDCW/L。高密度发酵是大规模制备重组蛋白质过程中不可缺少的工艺步骤。
细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学等学科的理论和技术,按照人们的需要,有计划、大规模地培养生物组织和细胞以获得生物及其产品,或者通过改变细胞的遗传组成以产生新的种或品种,为社会和人类生活提供需要。
单克隆抗体:是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。
多克隆抗体:由于病原微生物是含有多种抗原决定簇的抗原物质,因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物,故称多克隆抗体,即针对多种抗原决定簇的抗体。
人-鼠嵌合抗体:在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链(H)和轻链(L)可变区分离出来,分别与人Ig的重链和轻链的稳定区(C)基因连接成人-鼠嵌合体的H和L链基因,再共转染骨髓瘤细胞,就能表达出完整的人-鼠嵌合抗体。
改形抗体:用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中的CDR序列,即可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。可基本消除免疫原性。这种改形抗体又称CDR移植抗体。
Fab抗体用胃蛋白酶可将IgG的重链在铰链区的C端处裂解,获得两个完全相同的抗原结合片段(Fab),在Fab片段之间仍保留有铰链区与二硫键,为Fab双体,具有完整的双价抗体活性,但相对分子质量减少了1/3,为10000,在人体内产生的抗鼠蛋白的排斥反应也相应的降低至30%,由于仍保持抗体分子的立体构型,因此在人体内仍然很稳定,成为小分子抗体的雏形,称Fab抗体。
Fv抗体:用胃蛋白酶水解抗DNP(二硝基苯酚)单克隆抗体产生Fab片段后,过Sephadex G-75柱时,显示出两个峰,第一个峰为Fab主峰,第二个峰的抗体结合片段的分子大小约为Fab的一半,这个片段含有L链和Fd链一半的N端可变区,具有与完整抗体相似的结合能力,因此命名为“抗体可变区片段”,称Fv抗体。
单链抗体:是由一段弹性连接肽把抗体可变区重链(VH)与轻链(VL)相连而成,是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。
植物细胞的全能性:植物体中任何一个具有完整细胞核(完整染色体组)的细胞,在一定条件下都可以重新再分化形成原来的个体。
植物的分化:导致细胞形成不同结构,引起功能改变或潜在发育方式改变的过程,可分为胚胎发生和器官发生。
脱分化:培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。
再分化:通过脱分化诱导形成的愈伤组织在适宜的培养条件下可再分化成为胚状体或直接分化出器官。
愈伤组织:从植物的各种组织、器官等外植体经脱分化而形成的细胞聚集体。
继代培养:由最初的外植体上切下的新增殖的组织,培养一代时间称之为第一代培养,连续多代的培养即为继代培养。
5. 固定化酶:是指限制或固定于特定空间位置的酶,具体来说,是指经物理或化学方法处理,使酶变成不易随水流失即运动受到限制,而又能发挥催化作用的酶制剂。
固定化细胞:被限制或定位于特定空间位置的细胞,与固定化酶一起被称为固定化生物催化剂。
模拟酶:根据酶的作用原理,用各种方法人为制造的具有酶性质的催化剂,简称人工酶或模拟酶。
技术原理
制备基因工程药物的基本过程
获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌(或细胞)→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装
反转录法获得目的基因的基本过程
cDNA法(反转录法)
①mRNA的纯化
②cDNA第一链的合成
③cDNA第二链的合成
自身引导法:获得的双链cDNA 5’端会有几对碱基缺失
置换合成法:获得的双链cDNA 5’端也会有几对碱基缺失
③双链cDNA的克隆
平头末端直接与载体连接,但插入的片段无法回收
平头两端分别接同聚物尾,最好是AT同聚物尾,这样重组分子可通过加热局部变性和S1核酸酶处理回收插入片段
加装人工接头引入酶切口,以便插入片段回收
④目的cDNA文库的鉴定
局限性:①并非所有的mRNA分子都具有polyA结构;
②细菌或原核生物的mRNA半衰期很短;
③mRNA在细胞中含量少,对酶和碱极为敏感,分离纯化困难;
④仅限于克隆蛋白质编码基因
目的基因获得的方法有哪些
鸟枪法:随机克隆目的基因的全基因组DNA片段,然后通过快速有效的筛选程序从众多克隆中分离出含有目的基因的重组子,进