CIK细胞对白血病微小残留病作用的研究.docx

文档介绍：CIK细胞对白血病微小残留病作用的研究
作者:肖中平封韬王雪野韩梅肖中平
【摘要】 目的观察CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞的杀伤作用,对G0期CD34+白血病细胞的细胞毒作用,及对正常骨髓造血干细胞的影响。方法取急性白血病(AL)化疗后、慢性粒细胞白血病(CML)慢性期及正常人外周血单个核细胞加入一系列细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测CIK表型,G带法分析CIK细胞核型。冻存、复苏后作为靶细胞,MTT法测定CIK细胞对自体、异铄体原代白血病细胞杀伤作用倚。AO染色法测定复苏后G犟0期急性粒细胞白血病(AぴML)CD34+细胞比例勒及培养后CMLCD34+蒗细胞中G0期细胞比例。流式细胞仪检测CIK细胞杀鹂伤前后G0期CD34+细胞比例变化。半固体培养法蘧检测CIK细胞对正常骨髓CFUGM、BFUE令集落形成的影响。结果CI颗K细胞可从白血病患者外周血中获得,来源于正常淋巴委细胞,对自体原代白血病细窨胞有明显杀伤作用,对G0袒期白血病细胞有明显抑制作哀用,对正常造血干细胞无杀羿伤作用。结论CIK细胞可莴作为清除残留白血病细胞的有效工具。
【关键词】 竿白血病;微小残留病;CI佼K细胞
完全缓解的白血病阵患者体内,常残存耐药的、处于静止期的微小残留白血蜊病细胞,是复发的根源。本铖研究从白血病患者外周血中
棉培养出的CIK细胞,不含有白血病干细胞,能有效杀伤G0期CD34+白血病揭干细胞,而且这种杀伤作用喝具有选择性,不损伤正常造穰血干细胞,可以作为有效的搪免疫细胞来清除白血病患者醣体内的为微小残留病,值得临床使用。
1 材料和方梭法
 对象 
本院血液科蔽XX年1月至XX年10月雯15例急性白血病治疗后完碰全缓解患者,5例慢性粒细汞胞白血病慢性期患者,5例胲正常人。诊断均符合《血液锪病诊断及疗效标准》〔1〕羝。
 试剂和仪器 
白介匹素(IL)1,英国Pe翔proTechINC公司蓦;IL2,沈阳三生公司鼾;CD3抗体,美国Pha骗rMingen公司;干扰素(IFN)γ,英国P鹿eproTechINC公邡司;CD3FITC单抗鳆、CD56PE单抗、C壑D34APC单抗、Ig愚GFITC单抗、IgG唁PE单抗,美国Phar愀Mingen公司;EPICSXL流式细胞仪,美国浓贝克曼库尔特公司。
 虱方法
 CIK细胞的培养妪与测定 
CIK细胞的诱导与培养:取15例AL化牍疗后CR患者、5例CML褶患者、5例正常人外周血分离单个核细胞,第1天加入ぷIFNγ1000μl/m峙l,第2天加入CD3单抗50ng/ml、IL21000μl/ml、IL浪1100μl/ml,诱导培养CIK细胞。流式细伺胞仪(FCM)检测CIK荀细胞表型:在培养至第1、芫2、3周时,分别取105┙CIK细胞,标记CD3FITC单抗、CD56撖PE单抗20μl,对照管固加入IgGPE、IgG劲FITC20μl,避光钠孵育20min,用PBS嘶洗涤后,再加1g/L多聚戡甲醛固定,4℃避光保存,爹1w内上机检测。染色体G带法分析CIK细胞核型:震取4例CML患者、1例A癯PL患者外周血单个核细胞打培养至第3~4周CIK细镇胞5ml(1×106/m缙l),加秋水仙胺至终浓度ng/ml