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1575年,。
1852年,Sir e Stokes对荧光产生的机理作了解释,并提出了“荧光”。
1867年,首次用于分析测定。
1928年,Jette和West提出第一台光电荧光计。
1952年,商品荧光分光光度计出现。
分子荧光与分子磷光分析法
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发光机理(Jablonski Diagram)
荧光寿命:
10-9~10-7 s
磷光寿命:
10-4~10 s
分子吸光与发光示意图
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吸收光谱
发射光谱
蒽的激发光谱(吸收光谱)和发射光谱(荧光光谱)
激发光谱:Excitation Spectrum, 激发波长:ex
发射光谱 Emission Spectrum, 发射波长:em
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荧光分析法测定血清中的镁
镁-Oxine的激发光谱和发射光谱
/
5
荧光光谱的特点
Stokes位移:分子荧光的发射峰相对于吸收峰位移到较长的波长.
荧光发射光谱的形状与激发波长的选择无关.
镜像规则:荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系.
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定量分析的基础 —荧光强度(F )与物质浓度(c)的关系
在稀溶液中:
F= cI0=
φ—荧光物质的荧光效率(量子产率):
ε—荧光物质的吸光系数
b—液层厚度
I0—入射光强度
K—检测效率(由仪器决定)
当b,I0一定时: F=Kc
7
F
c
一般当εb c 时, F 与c呈线性关系
高浓度时,荧光物质发生自熄灭和自吸收现象,使F与c不呈线性关系
F
c
8
荧光与分子结构的关系
→* 跃迁
芳香族化合物、五元杂环上取代苯基.
共轭体系越大,越易产生荧光,荧光效率也增大.
─(CH=CH)3─
φ=
─(CH=CH)2─
φ=
9
2. 刚性结构和共平面效应
酚酞(无荧光)
8-羟基喹啉(弱荧光)
红色荧光
C
O
-
O
O
C
O
O
-
C
O
C
O
O
-
-
O
N
O
-
N
O
Mg
N
O
荧光黄
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