文档介绍：基因工程填空背诵
1 基因工程的概念:基因工程是在DNA分子水平上进行操作,因此又叫做重组DNA技术。
2 基因工程的基本工具:限制酶、DNA连接酶、运载体
3 限制酶来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
4 限制酶的功能:识别特定的核苷酸序列,并在特定位点切割磷酸二酯键。
5 限制酶切割的结果:黏性末端和平末端。
6 DNA连接酶功能:恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
7 DNA聚合酶的作用部位是磷酸二酯键。
8 运载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存;②具有一至多个限制酶切割位点,供外源DN***段插入;③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
9 基因工程常用的载体有: 质粒、噬菌体和动、植物病毒等。
10 最早应用的载体是质粒,它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。
11基因的基本操作程序:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
12 基因工程的核心是:基因表达载体的构建。
13 获取目的基因的方法是①从自然界中已有的物种中分离出来,如可从基因文库中获取。②人工合成法:逆转录法和化学合成法。③PCR扩增
取原核细胞的目的基因方法一般是:直接分离法。
获取真核细胞的目的基因一般是人工合成法。
16 PCR是聚合酶链式反应的缩写,是一种在生物体外复制特定DN***断的核酸合成技术。17 PCR原理是:DNA双连复制的原理。前提是:要有一段已知目的基因的核苷酸序列。
18 PCR条件:模板、ATP、酶、原料(四种游离的脱氧核苷酸)
19 PCR酶:热稳定DNA聚合酶(耐高温DNA聚合酶)
20 即基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子、标记基因
21标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
基因表达载体构建方法:同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接形成重组质粒。
将目的基因导入植物细胞:最常用方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法。
农杆菌转化法原理: ①农杆菌能感染双子叶植物和裸子植物. ②农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并整合到受体细胞染色体DNA上。
将目的基因导入动物细胞:显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。
选受精卵做受体的原因:具有发育的全能性
将目的基因导入微生物细胞:Ca+处理法。
选用微生物作为受体细胞的优点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少
将目的基因导入水稻(单子叶植物)方法是:基因枪法或花粉管通道法
目的基因检测与鉴定首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术。
其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是采用分子杂交技术。
最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是采用抗原—抗体杂交技术。
。如抗虫或抗病的接种实验等。
目的基因成功表达的标志:受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质(具体题目写出具体的蛋白质)。
从结构上分析,为什么不同生物的DNA能够连接在一起?①具有共同的DNA双螺旋结构②同种限制酶切割后形成的粘性末端相同
(或粘性末端可以碱基互补配对)
目的基因能在受体细胞中表达的