1 / 17
文档名称:

广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定.docx

格式:docx   大小:526KB   页数:17页
下载后只包含 1 个 DOCX 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定.docx

上传人:科技星球 2024/5/7 文件大小:526 KB

下载得到文件列表

广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定.docx

相关文档

文档介绍

文档介绍:该【广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定 】是由【科技星球】上传分享,文档一共【17】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。广西芒果细菌性坏死病病原菌鉴定??陈小林孙秋玲黄穗萍唐利华郭堂勋莫贱友任惠李其利Summary芒果Mangifera?indica?,近年来细菌性病害发生严重。2020年-2021年对广西百色地区的芒果病害进行调查发现,一种细菌性坏死病与细菌性黑斑病混合发生,一般发病率30%~60%,严重可达90%以上。本研究先后从该地区不同芒果坏死病组织中分离得到泛菌属的21株细菌。根据形态、生理生化特性、16S?rDNA、fusA、gyrB、leuS、pyrG、rlpB和rpoB的多基因系统发育分析、致病性测定等方法将21个菌株分别鉴定为Pantoea?vagans、、P.?dispersa?和P.?cypripedii。、P.?dispersa?和P.?cypripedii引起芒果细菌性坏死病是中国首次报道。Key芒果;?细菌性坏死病;?泛菌属:S?:?ADOI:?.2022772Identification?of?the?pathogen?causing?mango?bacterial?necrotic?disease?in?GuangxiCHEN?Xiaolin1,?SUN?Qiuling1,?HUANG?Suiping1,?TANG?Lihua1,?GUO?Tangxun1,MO?Jianyou1,?REN?Hui2*,?LI?Qili1*(1.?Institute?of?Plant?Protection,?Guangxi?Academy?of?Agricultural?Sciences,?Key?Laboratory?of?Green?Prevention?and?Control?on?Fruits?and?Vegetables?in?South?China,?Ministry?of?Agriculture?and?Rural?Affairs,?Guangxi?Key?Laboratory?of?Biology?for?Crop?Diseases?and?Insect?Pests,?Nanning?530007,?China;?2.?Institute?of?Horticulture,?Guangxi?Academy?of?Agricultural?Sciences,?Nanning?530007,?China)AbstractMangifera?indica?L.?is?one?of?the?wellknown?fruits?in?China.?Bacterial?diseases?have?been?occurring?seriously?in?recent?years.?A?bacterial?necrotic?disease?mixed?with?bacterial?black?spot?disease?on?mango?was?observed,?with?an?incidence?rate?of?30%-60%,?even?up?to?90%,?in?our?investigation?of?mango?diseases?in?Baise,?Guangxi?from?2020?to?2021.?Twentyone?isolates?belonging?to?the?genus?Pantoea?were?essively?isolated?from?the?mango?necrotic?tissues?in?investigation?region?in?this?study.?The?isolates?were?identified?as?four?species:?Pantoea?vagans,?,?P.?dispersa?and?P.?cypripedii?based?on?the?morphological,?physiobiochemical?characteristics,?16S?rDNA?sequence,?ic?analysis?of?fusAgyrBleuSpyrGrlpBrpoB?concatenated?sequences?and?pathogenicity?test.?This?is?the?first?report?of?necrotic?disease?caused?by?,?P.?dispersa?and?P.?cypripedii?in?mango?in??wordsMangifera?indica;?bacterial?necrotic?disease;?Pantoea芒果Mangifera?indica?,主要种植于印度、中国和泰国等热带和亚热带国家[12]。,产量近95万t,为我国第一大芒果产区[3]。随着品种结构改变和气候变化,芒果细菌性病害发生日益增多,近年呈加重趋势,严重影响芒果产量和品质,制约广西芒果产业健康发展[4]。已报道引起芒果细菌性病害的病原菌,主要包括引起芒果细菌性黑斑病(又称芒果细菌性角斑病)的柑橘黃单胞菌芒果致病变种Xanthomonas?citri?pv.?mangiferaeindicae[56],引起芒果细菌性顶端坏死病的丁香假单胞菌Pseudomonas?syringae?pv.?syringae[7],[8],引起芒果细菌性干枯病的血红鞘氨醇单胞菌Sphingomonas?sanguinis[910]和引起芒果细菌性坏死病的泛菌属细菌Pantoea?ananatis[11]、[12]?[13]等种类。2020年-2021年对广西芒果主产地百色田东县、田阳县、右江区和田林县不同果园的病害进行调查,发现芒果上发生一种类似于细菌性黑斑病的坏死病,两者常混合发生,一般株发病率30%~60%,严重时可达90%以上。为明确该病害的病原菌,本研究对田间采集的病害样品进行病原菌的分离、纯化、培养,并采用形态学观察和生理生化特性、致病性测定、多基因系统发育分析等方法对分离物进行鉴定,旨在明确广西细菌性坏死病的病原菌种类和优势种群,为深入研究其发生规律和防治技术提供参考。1??病害调查及病样采集2020年-2021年在广西芒果主产地百色地区不同种植区(田东县、田林县、田阳县和右江区)采集不同品种芒果上类似细菌性黑斑病的坏死病样品。?病原菌的分离与纯化选取叶片或果实病样,切取病健交界处组织(5?mm×5?mm),75%乙醇浸泡10?s,2%次***酸钠浸泡1?min,灭菌水冲洗3次,置于研钵中,加入少量石英砂和1?mL灭菌水进行充分研磨,吸取100?μL上清液至分装有900??mL离心管进行系列梯度稀释,吸取10-3~10-6梯度各100?μL涂布于LB固体平板上,28℃恒温培养箱中培养,每份样品选择不同菌落形态的代表性菌株1株进行保存。??菌株的分子生物学鉴定将分离菌株在LB液体培养基中培养24?h,采用细菌基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取菌株总DNA。利用细菌16S?rDNA的通用引物27F(5′TGGCTCAG3′)和1492R(5′TTGTTACGACTT3′)对36株供试菌株基因组DNA进行PCR扩增[14]。20?μL?PCR反应体系:2×PCR?buffer?(plus?Mg2+)10?μL,dNTPs(?mmol/L)?μL,DNA模板1?μL,上、下游引物(10?μmol/L)各1?μL,Taq?酶(5?U/μL)?μL,ddH2O??μL。PCR反应条件为94℃预变性3?min;94℃变性45?s,57℃退火45?s,72℃延伸1?min,35个循环;72℃延伸5?min。泛菌多位点序列包括延伸因子EFG基因(fusA)、DNA促旋酶基因(gyrB)、亮氨酰tRNA合成酶基因(leuS)、CTP合成酶基因(pyrG)、脂蛋白基因(rlpB)和RNA聚合酶β亚基基因(rpoB)的扩增引物信息、退火温度及扩增产物大小见表1[15]。%琼脂糖凝胶检测条带后,产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。测序结果提交NCBI在线网站进行相似性比对,使用MEGA?X的最大似然法构建系统发育树,确定近缘细菌菌株的分类地位。?形态与生理生化特性鉴定将分离菌株接种于LB固体培养基上,28℃培养2?d,观察菌落形态、大小、颜色、表面及边缘形态、透明度等特征;对细菌进行革兰氏染色,观察染色结果。参照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第8版)进行生理生化特性测定:3%耐盐性、氧化酶和过氧化氢酶活性、***盐还原试验、淀粉水解、明胶液化、硫化氢的产生以及碳源(蔗糖、