文档介绍：ELISA测定结果影响因素*主要内容一、ELISA简介二、ELISA试验结果影响因素ELISA简介ELISA( EnzymeLinked Immunosorbnent Assay )是酶联接免疫吸附测定的简称。是一种免疫学测定方法,主要通过抗原抗体反应检测液体标本中目的蛋白性质、功能及含量。ELISA实验原理抗原或抗体在体外结合到某种固相载体表面后,仍然能保持其免疫学活性并能相互特异性结合。抗原抗体复合物与酶标二抗结合,加入合适的底物,在酶的作用下显色,颜色深浅与特异性抗体成比例关系,可进行定性和定量分析。抗原抗体反应的特异性+酶高效催化反应的专一性ELISA检测方法抗原测定方法抗体测定方法双抗体夹心法竞争法双抗原夹心法竞争法间接法主要操作流程+已知抗体包被于载体表面加待检物无抗原与抗体结合洗涤洗涤洗涤洗涤- (1)肉眼观察:比较检测孔与对照孔的颜色。(2)阳性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般为阴性对照的平均A值加一个常数,标本A值≥CO值即为阳性。(3)抑制率法:在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。抑制率(%)=(阴性对照A-待测A)/阴性对照AX100%,一般以抑制率≥50% 结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后,进行ELISA检测,在阳性临界值以上的最高稀释度即为该标本的“滴度”。 用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,与待测标本同时进行测定,绘制标准曲线,结果以绝对量或活性单位表示。ELISA结果判定结果判定方法的选择:间接法和夹心法ELSIA(阳性孔呈色深于阴性孔)竞争法ELISA(阳性孔呈色浅于阴性孔).。但测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时会出现一些错误结果。引起错误结果的原因主要有:1、标本因素2、试剂因素3、操作因素4、环境因素。结果影响因素——标本因素内源性物质类风湿因子补体嗜异性抗体自身抗体医源性诱导的抗体交叉反应物外源性物质标本溶血标本污染贮存过久凝集不全采血管中添加物标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种。