文档介绍：组织培养实验报告植物组织培养实验报告一、;,掌握母液的配置和保存方法;、茎、叶形成愈伤组织学****愈伤组织的建立方法;、叶形成愈伤组织学****愈伤组织的建立方法;、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。二、实验原理(一)植物组织培养植物组织培养是把植物的器官,组织以至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下,能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。(二)植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。(三)组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后,经过继代培养,可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团,然后,再分化成不同的器官原基。有些情况下,外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。(四)培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素(生长调节剂)和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70%酒精、%升***、ms培养基、蒸馏水、naoh、84消毒液、蔗糖、琼脂等。六、实验步骤(一)(单位:mg/l)(ml)50050050050050020020050吸取毫升数/l202020202010105(注:吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积)(注:根据表1与表2计算各物质的称取量)药品名称nh4no3kno3kh2po4称取量(mg)41250475004250药品名称kina2mno4?2h2ocuso4?5h2o称取量(mg)?2h2o11000cocl2??7h2o9250肌醇2000feso4?4h2o695甘氨酸40na-***素8mnso4??7h2o215烟酸10h3bo3155(1)ms大量元素母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解,定容至500ml存放于冰箱中备用。名称重量(mg)名称重量(mg)nh4no3kno34125047500kh2po4cacl2·2h2o425011000(2)ms微量元素母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解,定容至500ml存放于冰箱中备用。名称kih3bo3mnso4·7h2oznso4·7h2o重量(mg)·2h2ocuso4·5h2ococl2·6h2o重量(mg)(3)ms有机母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解,定容至200ml存放于冰箱中备用。名称肌醇烟酸盐酸吡哆醇重量(mg)名称盐酸硫***素甘氨酸重量(mg)20001010840(4)ms铁盐母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解,定容至500ml存放于冰箱中备用。名称edta二钠重量(mg)·4h2o重量(mg)695(5)ms钙盐母液的配制参考表3称取11000mg的cacl2?2h2o用蒸馏水溶解定容至500ml,保存于冰箱备用。(6)ms镁盐母液的配制参考表3称取9250mg的mgso4?7h2o用蒸馏水溶解定容至500ml,保存于冰箱备用。(7)ms肌醇母液的配制参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ml,保存于冰箱备用。(8)ms激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的naoh溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。(二)培养基的配制以配制1l的ms培养基