文档介绍：实验一、 DNA 的提取,核酸的琼脂糖凝胶电泳主要内容?1、基因组 DNA 的提取; ?2、核酸的琼脂糖凝胶电泳应达到的基本要求或能力标准?掌握 DNA 提取原理与方法;核酸的琼脂糖凝胶电泳原理与方法 1. DNA 提取?天然状态的 DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP) 形式存在于细胞核中。?在浓氯化钠( 1-2mol/L )溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠( )溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。 DNA 提取原理 DNA 提取原理? CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中结合核酸、沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。?阴离子去污剂(如 SDS, 十二烷基磺酸钠)处理核蛋白, DNA (或 RNA )即与蛋白质分开,酚-氯仿- 异戊醇处理,而 DNA 则溶解于溶液中。向溶液中加入适量有机物(乙醇或异丙醇), DNA 即析出。?酚-氯仿作为蛋白变性剂,同时抑制 DNase 的降解作用, 蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。混合后离心, 蛋白分子溶于酚相,而 DNA 溶于水相。? DNA 、 RNA 和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。?三羟甲基氨基甲烷( Tris ) () 提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;? EDTA 螯合 Mg 2+、 Mn 2+离子,抑制 DNase 活性; ? NaCl 提供一个高盐环境,使 DNP 充分溶解,存在于液相中;?异戊醇能消除抽提过程中出现的泡沫? 70% 的乙醇洗涤,以除去盐离子等?反复冻融法?超声波处理法?冷热交替法?有机溶剂处理法?去污剂?溶胀法?细胞破碎方法: ?