文档介绍：附录ⅪA 人用狂犬病疫苗效价测定法( NIH 法) 本法系将供试品免疫小鼠后,产生相应的抗体,通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。试剂稀释液(PBS )量取 % 磷酸二氢钾溶液 75ml 、% 磷酸氢二钠(Na 2HPO 4· 12H 2O)溶液 425ml 、% 氯化钠溶液 500ml ,混合后加水至 5000ml ,调 pH值至 ~ 。攻击毒株 CVS 制备启开毒种,稀释成 10 -2悬液,接种 11~13g 小鼠,不少于 8 只,每只脑内接种 ,连续传 2~3 代,选择接种 4~5 天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织,研磨后加入含 2% 马血清或小牛血清制成 20% 悬液,经每分钟 1000 转离心 10 分钟,取上清液经病毒滴定(用 10只18~20g 小鼠滴定)及无菌检查符合规定后作攻击毒用。参考疫苗的稀释参考疫苗用 PBS 稀释成 1∶25、1∶125 和1∶625 等稀释度。供试品溶液的制备供试品用 PBS 做5倍系列稀。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫 12~14g 小鼠 16 只,每只小鼠腹腔注射 ,间隔 1周再免疫 1次。小鼠于第一次免疫后 14天,用经预先测定的含 5~100 个LD 50的病毒量进行脑内攻击,每只。同时将攻击毒稀释成 10 0、10 -1、10 -2和10 -3进行毒力滴定, 每个稀释度均不少于 8 只小鼠。小鼠攻击后逐日观察 14 天,并记录死亡情况, 统计第 5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。计算供试品和参考疫苗 ED 50值。计算相对效力 P=T/S ×d T/d S×D式中 P为供试品效价, IU/ml; T为供试品 ED 50的倒数; S为参考疫苗 ED 50的倒数; d T为供试品的一次人用剂量, ml; d S为参考疫苗的一次人用剂量, ml; D为参考疫苗的效价, IU/ml 。【附注】(1)动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。(2)各组动物均应在同样条件下饲养。(3)攻击毒原病毒液(10 0)注射的小鼠应 80% 以上死亡。