文档介绍：§1-1 DNA重组技术的基本工具和基本操作程序
专题1 基因工程
精选课件
一 基因工程的基本内容
主要内容
（一）基因工程的概念
（二）基因工程的基本工具
（三）基因工程的基本操作程序
（四）基因工程的（补充内容）
编码区
非编码区
非编码区
与RNA聚合酶
结合位点
内含子
外显子
启动子
终止子
编码区上游
编码区下游
真核细胞的 基因结构
编码区
非编码区
外显子：能编码蛋白质的序列
内含子：不能编码蛋白质的序列
：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子
非编码序列：
包括非编码区和内含子
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原核细胞
真核细胞
不同点
编码区是
_____的
编码区是间隔的、_____的
相同点
都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
连续
不连续
编码区
非编码
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四个基本步骤：
三、基因工程的基本操作程序
1）提取目的基因
2）目的基因与运载体结合
3）将目的基因导入受体细胞
4）目的基因的检测和表达
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目的基因
目的基因是人们所需要转移或改造的基因。
如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。
供体生物细胞
取出DNA
用限制酶剪去多余部分
目的基因
限制酶
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1、目的基因的获取
1〉目的基因主要是指______________________
编码蛋白质的结构基因
请举出三个以上的例子
2〉获取目的基因的常用方法
（1）从基因文库中获取
（2）利用PCR技术扩增
（3）人工合成
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概念：基因文库
（gene library）
基因组文库
部分基因文库（如cDNA文库）
将含有某种生物不同基因的许多DN***段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library)
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基因组文库:
基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.
部分基因文库:
基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.
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基因组文库与部分基因文库的关系
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cDNA文库的构建
mRNA
反转录
cDNA
(互补DNA）
DNA聚合酶
双链DNA
②反转录法：
基因重组
反转录酶
mRNA
cDNA
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基因组DNA文库
cDNA文库
基因组DNA文库与cDNA文库的比较
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如何从基因文库中得到所需要的基因？
依据：目的基因的有关信息。
如：根据基因的核苷酸序列
基因的功能基因在染色体上的位置
基因的转录产物mRNA
基因翻译产物蛋白质 等特性。
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④利用PCR技术扩增目的基因
PCR——聚合酶链式反应
是一项生物体外复制特定DN***段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。
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DNA序列自动测序仪：
PCR技术：
对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。
使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。
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⑤ 人工合成
——根据已知的氨基酸序列合成DNA
蛋白质的氨基酸序列
mRNA的核苷酸序列
结构基因的核苷酸序列
推测
推测
目的基因
化学合成
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3、基因表达载体（重组质粒）的构建
（1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。
（2）用___________切断目
的基因，使其产生_____
____________。
（3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组
DNA分子（重组质粒）
限制酶
黏性末端
同一种限制酶
的黏性末端
切口
DNA连接酶
相同
1〉过程:
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2〉基因表达载体的组成：
它们有什么作用？
a、目的基因
b、启动子
c、终止子
d、标记基因
位于基因的首端,是mRNA结合位点
位于基因的末端,终止转录
检测目的基因是否导入受体细胞
条件
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步骤二：目的基因与运载体重组
1）用一定