文档介绍：Hessen was revised in January 2021
琼脂糖凝胶的制备
琼脂糖凝胶的制备
#配制1*TE电泳及制胶缓冲液（用于电泳的缓冲液和制胶的缓冲液必须是相同的）。
#在三角锥瓶中加入 Hessen was revised in January 2021
琼脂糖凝胶的制备
琼脂糖凝胶的制备
#配制1*TE电泳及制胶缓冲液（用于电泳的缓冲液和制胶的缓冲液必须是相同的）。
#在三角锥瓶中加入60ml制胶缓冲液+琼脂糖粉，制成2%琼脂糖。
#在微波炉中加热溶解琼脂糖。（用微波炉加热琼脂糖时，要防止过热引起琼脂糖沸腾溢出。把称量好的琼脂粉先在电泳缓冲液中溶解5-10min，可降低沸腾溢出的可能性）
#使溶液冷却到60度左右，加入5ul 2%EB（溴化乙锭）溶液。（溴化乙锭见光会分解，致癌物质）
#将琼脂糖溶液倒入灌胶盒中，在适当位置插上梳子。灌胶前要确保灌胶盒放置在水平面上。凝胶厚度一般在3-5mm之间。
（一般琼脂糖凝胶灌注厚度不超过。一旦凝胶厚度超过，样品的转移效率就会降低，需要更长的时间才能使样品充分转移到膜上。）
（溶化的琼脂糖是澄清的，在灌胶盒里冷却的过程中会逐步变得不透明。在胶完全凝固之前不要移动灌胶盒）。
（最佳的灌胶方式是在齿梳插入前，把琼脂糖溶液缓慢而匀速的倒入灌胶盒中部，直至整个灌胶盒的表面被覆盖时就可以停止，然后立即插上梳子。会得到均一的没有气泡的凝胶。假如仍然有气泡，可以用灭菌枪头的尖端把气泡挑出或者赶到边缘。）
(配制凝胶时，核糖核酸酶（RNase）可能会污染电泳仪器，特别是齿梳部分。虽然可用某些变性剂抑制核糖核酸酶的活性，但是它们可以转移到或干扰后续的实验部分。如果没有其他情况，梳子必须被浸泡在3%的H2O2或是%SDS、50mmol/l EDTA溶液中，再在使用前用大量的无菌水冲洗。不要使用DEPC或30%的H2O2，它们不仅对电泳槽有损害，对使用者也可能造成危险。)
（灌胶盒一定要清洗干净、烘干，否则灌胶后会看到胶下面有大量气泡，这时因为胶与水不相容）
#室温下使胶凝固（大约30min），然后放置到电泳槽中，倒上电泳缓冲液（电泳缓冲液刚好没过凝胶1mm为好），拔出梳子。
（应给予充分的时间，使胶凝固。拔梳子前把胶浸没在电泳缓冲液中，这样可以减少拔梳子时大气压力造成的影响，降低上样孔底部被破坏的可能性。假如加样孔被破坏却未能察觉，RNA样品上样后会漏掉。）
（用最小体积的电泳缓冲液完全覆盖凝胶。因为电流倾向于走电阻最小的路径，也就是说倾向于绕过而非穿过凝胶。所以过多的缓冲液可以降低电泳速度。
另外要记得检查边缘处的凝胶，凝胶与盒子的边缘结合处会产生倾斜的截面，如果这部分没有完全没在缓冲液中则不能很好的散热，累积的高温效应会融化部分琼脂糖凝胶。
另外要尽量避免在外侧泳道上样，因为凝胶的厚度不均一，外侧泳道的迁移率会不一致（边缘效应）。）
#上样。桌面上铺一张EP手套，