文档介绍：乳酸的测定:
对羟基联苯比色法(参照高庆，2005)
.材料、试剂与仪器
无水乳酸锂、对羟基联苯、鸨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：
①鸨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)鸨酸钠 (N乳酸的测定:
对羟基联苯比色法(参照高庆，2005)
.材料、试剂与仪器
无水乳酸锂、对羟基联苯、鸨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：
①鸨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)鸨酸钠 (Na2WO4 2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；
②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜 (CuSO45H2O) 20g,加蒸储水70ml,加热使之溶解，再加入蒸储水定容至 100ml;
③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于 100ml的L氢氧化钠溶液中(配制时加热助溶，溶解后为澄清液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4 c冰箱，可使用一个月；
④乳酸标准储存液(1mg/ml):精确称取无水乳
酸锂，溶于50ml蒸储水中，加 L硫酸20ml, 后加蒸储水定容至 100ml,混匀后保存于 4c 冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL 加蒸储水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200 g g/mL):使用时取储存液10mL用蒸储水稀释至50mL。在冰箱中可保存数天。
主要仪器：
UNIC UV-2100紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管 5ml及具塞比色管20ml o
.方法
青贮浸提液样品预处理
取适量青贮浸提液样品 5000r/min离心10min, 取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入鸨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物(约30〜45min ), 10000r/m 离心10min,取上清液置于 5ml洁净具塞试管中，60c水浴保温30min左右，冷却待用。
标准曲线的制作
①用200Lg/mL乳酸应用标准液
同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后 (可以不稀释)，按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸储水。
表1 乳酸标准液配制
试管号］? 3 4 5 6T
灌液［nJJ () 0. 10 0. 3(1 。.力 0,40 丘 50 d植)
蒸埔水［ml」 L9O 1. KI) L 天) L «) L 50 1 闾
②各管中分别加入氢氧化钙粉末 100mg,混
匀,8000r/min离心5min,取上清液，加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中，混匀，加
20%硫酸铜溶液，称重，迅速混匀，沸水浴3min,水浴冷却，补足重量,3000r/min离心5min,各吸上清液加入比色管中。③在各管加入251iL的4% 硫酸铜溶液，混匀后置冰水浴内冷却。④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中，每管各加，边加边摇，混匀后