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蛋白质及氨基酸的呈色反应
蛋白质的沉淀反应
。
,了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。
【目的和要求】
(一)蛋白质及氨基酸的呈色反应
双缩脲在碱性条件下可与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。
蛋白质或二肽以上的多肽分子中,含有多个与双缩脲结构相似的肽键,因此也有双缩脲反应,可用此法鉴定蛋白质的定性和定量。

【实验原理】
水合茚三酮
还原茚三酮
紫色物质
注意:脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。
此反应用于定性、定量鉴定氨基酸。

(二)蛋白质的沉淀反应
蛋白质分子由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒。
在一定的物理化学因素影响下,蛋白质颗粒失去电荷、脱水,甚至变性而丧失稳定因素,即以固态形式从溶液中析出,这种作用称为蛋白质的沉淀反应。
蛋白质
H2O
H2O
H2O
H2O
+
+
+
+
(pH>pI)

在发生沉淀反应时,蛋白质虽已沉淀析出,但其分子内部结构并未发生显著变化,基本上保持原有的性质。沉淀因素除去后,蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀反应称为可逆沉淀反应。
盐析作用
脱去水化层
电荷被中和
低温下乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作用
等电点沉淀
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。
在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。

重金属盐
有机溶剂
生物碱试剂
过酸、过碱
加热、震荡、超生波
【实验方法】
双缩脲反应:
取少量尿素结晶,加入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时,停止加热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷后加入10滴双缩脲试剂,混匀,观察颜色变化。
另取1支试管,加入卵清蛋白溶液1ml再加入5滴双缩脲试剂,混匀,观察颜色变化。

取2支试管,%甘氨酸溶液4滴,%茚三酮乙醇溶液,混匀,在沸水浴中加热1-2分钟,放置冷却,观察颜色变化,并比较蛋白质和氨基酸呈色深浅。

取1支试管,加入3ml蛋白质-NaCl溶液和3ml饱和硫酸铵溶液,混匀,静置10分钟,球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻璃棒搅拌,至粉末不再溶解,析出的沉淀为清蛋白。静置,弃上部清液,取部分清蛋白沉淀加水稀释,观察它是否溶解。