文档介绍：第17章核酸技术
DNA重组技术
基因操作的主要技术
核酸技术的应用
生长激素基因注入小鼠受精卵中培育出了“硕鼠”
(1)重要的工具酶
(2) 载体
(3)DNA重组的过程
1 DNA重组技术
(1)重要的工具酶
它能够识别、切割双链DNA分子中的特定序列,这些特定序列多数为反向重复序列,一般长度是4、5或6bp。
①限制性内切酶
粘性末端:识别序列对称轴,左右两边切开, 形成凸出部分。
如 EcoR I: 5’---GAATTC
CTTAAG---3’
5’-G G C C- 3’
3’-C C G G -5’
HaeⅢ
平头末端:识别序列中间切开
同裂酶:产生相同的切割,形成相同的末端
同尾酶:识别不同的序列,形成相同的末端
③碱性磷酸酶
催化DNA和RNA5′-磷酸基团水解,
产生5′-羟基末端,减少载体自身的环化。
(2)载体
能将外源DNA带入宿主细胞,进行复制扩增或最终使外源基因得以表达的自主 DNA,称为载体(vector)。分为:
①克隆载体:用于基因的复制、扩增、测序等;
②穿梭载体:原核与真核细胞间遗传物质的转移;
③表达载体: 用于目的基因的表达。
(3)DNA重组的过程
①目的基因的获得
②选择和制备载体
③将目的基因与载体进行切割连接
④将重组体导入受体细胞
⑤阳性克隆的筛选和鉴定
⑥ DNA重组体的扩增、表达等研究