ELISA 双抗夹心法检测抗原幻灯片.ppt

文档介绍：ELISA 双抗体夹心法检测抗原
王春
复旦大学免疫学系
复旦大学免疫生物学研究所
<<细胞与分子免疫学技术>>
酶联免疫吸附实验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ,ELISA)
一种固相酶免疫测定技术,利用酶标记的抗原或者抗体,在固相载体上定量或定性测定特异性抗体、可溶性抗原及细胞表面抗原。
1971年由瑞典学者Engrall和Perlmann,荷兰学者weeman和Schuurs报道;
开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质测定的实验方法;
ELISA-测抗原(Ag)或抗体(Ab)三要素
抗原或抗体的固相化:已知的Ag/Ab结合到固相载体表面,并保持其免疫活性;
抗原或抗体的酶标记:酶标Ag/Ab,并保持其免疫活性和酶活性;
底物显色:底物被酶催化成为有色产物—定性和定量–放大免疫反应的信号
基本原理
高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性
高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,
p***平微量检测
定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值
基本特点
基本类型
抗体测定法
间接法检测特异性抗体
抗原测定法
直接竞争法检测可溶性抗原
双抗体夹心法检测可溶性抗原
(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原)
应用生物素-亲和素双抗体夹心ELISA法
显色
间接法检测特异性抗体
包被已知抗原
与待测抗体孵育
与酶标抗体孵育
加入底物
包被已知抗原
直接竞争法检测可溶性抗原
原理:待检抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合;待检抗原含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。