文档介绍：雨声红球藻提取工艺的优化
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【摘要】目的:优选从雨声红球藻提取虾青素的工艺。方法:以虾青素的提取量为考察目标,通过单因素法、正交设计法优化从雨声红球藻提取虾青素的提取工艺。结果:筛选最佳提取工艺为是加入50倍雨生红球藻量的二氯甲烷-乙醇(2:1)混合溶剂,在40℃下加热30min,提取2次。结论:筛选出来的提取工艺稳定可行、操作简单。
【关键词】雨生红球藻;虾青素;单因素法;正交设计法;提取
虾青素(Astaxanthin)是自然界中分布较为广泛的一种类胡萝卜素,化学名称为 3,3’ -二羟基-β,β’-胡萝卜素-4,4’-二酮,结构见左,分子式为C40H52O4,分子量为 。现阶段虾青素的来源主要有以下4 种[1]:化学合成、红发夫酵母发酵、雨生红球藻积累和虾蟹的壳。出于安全性的考虑,化学合成的虾青素现在使用受到越来越严格的限制;而红发夫酵母发酵的虾青素和虾、蟹下脚料中虾青素由于含量较低和培养成本过高等原因受到了极大的限制,目前雨生红球藻为现阶段虾青素的主要来源,雨生红球藻含有虾青素的量最高可达到细胞干重的4%[2],但我们在实际提取中很难提取到4%,甚至1%的提取率都难以达到。目前我们在破壁的基础上[3],优化提取工艺,使提取率得到提高,研究结果报告如下:
1 实验材料
实验试剂
雨生红球藻(购置云南爱尔发生物技术有限公司,批号:20150304P),KOH(广东光华化学厂有限公司产,型号:20100427,规格:分析纯),甲醇(广东光华科技股份有限公司产,型号:20150316,规格:分析纯),二氯甲烷(天津富宇精细化工有限公司产,型号:20150505,规格:分析纯),盐酸(佛山南
海志力化工有限公司产,批号:20150107,规格:分析纯),无水乙醇(广东光华科技股份有限公司产,规格:分析纯,批号:20140920),虾青素对照品(佛山市仁汇医药科技有限公司产,批号:20141216,纯度:%),甲醇(Oceanpak公司产,批号:Me-11840506,规格:色谱纯)。
实验仪器
集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司产品,型号:DF-101),电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产,型号:AL204),超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司产,型号:KQ3200B),循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司产,型号:SHZ-D(Ⅲ)),高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司产,型号:LC3000)。
2 实验方法与实验结果
虾青素含量测定方法的建立
色谱条件
参考文献的方法[4],色谱柱:Kromasil C18(25m×,5µm),流动相:甲醇-水(95:5),检测波长:474nm,流速:1ml/min,柱温:30℃;进样量:20μl,见图1。
标准曲线的制备
精密称取虾青素对照品10mg,置于100ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,超声溶解5min,过滤,配制成虾青素溶液(),分别吸