文档介绍：实验五酶联免疫吸附法测定抗血清效价
一、目的
学****和掌握ELISA的基本原理
间接ELISA
重点掌握
测定抗体效价的方法
测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,
再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
二、原理
其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。

其方法简单,方便讯速,特异性强。
二、酶及其底物
酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物,将得到不同的颜色反应.
ELISA的种类和变化
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA
抗原
一抗
酶标二抗
底物
间接法
间接法的原理
先将抗原吸附于载体表面,洗去未吸附的部分,
然后加入待测血清,使其中的特异抗体蛋白(第一抗体)与抗原结合物,再洗去未结合的部分,
加入酶抗体的抗体(第二抗体,即第一抗体的抗体),与抗原-抗体复合物相结合,产生酶标记的免疫复合物,洗去未结合的酶标记物,
加入底物,在酶的催化下产生有色物质,通过比色测定光密度值,即可算出抗血清中抗体的存在量。
抗血清效价
制备的免疫血清,必需进行效价的测定。
抗血清的效价:它与一定量抗原作用时出现肉眼可见颜色反应的最大稀释度。
分光光度计测定法:应用一系列连续稀释的抗血清,与固定的抗原反应,分析计算出现颜色的最大稀释度()。