文档介绍：临床免疫学检查
中国医科大学一院检验科
实验内容:
乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物检查
HBsAg-乙型肝炎病毒表面抗原
HBsAb -乙型肝炎病毒表面抗体
HBeAg -乙型肝炎病毒e抗原
HBeAb -乙型肝炎病毒e抗体
HBcAb -乙型肝炎病毒核心抗体
实验要求:
掌握酶联免疫的检测原理
了解试剂盒的使用
掌握乙型肝炎病毒标志物检测结果的临床意义
实验原理:
酶联免疫检测(ELISA)
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。
此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA是以免疫学反应为基础,
抗原、抗体的反应在固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,
微孔对蛋白有很好的吸附作用,(试剂盒已经包埋好相应的抗原、抗体蛋白成分)
每加入一种试剂孵育反应后,多余的游离反应物可洗涤除去,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
反应过程:
包被:将已知抗体或抗原通过物理吸附结合到固相载体表面使其固相化
抗原抗体反应:加入被检标本和酶标记物,使之与固相抗体或抗原发生免疫反应而被结合固定,经洗涤除去游离的酶标记物
酶促反应:加入酶底物,使之发生酶促反应而显色。
ELISA反应材料:
固相载体:聚苯乙烯或聚***乙烯
有较强的蛋白吸附性能
酶标记物:标记抗原或抗体的酶常选择
辣根过氧化物酶(HRP)
酶底物: 四***联苯***(TMB)
受酶作用后呈蓝色
ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。
而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,使本法具有很高的敏感性。
反应类型
夹心法
间接法
竞争法
捕获法
应用生物素-亲和素系统的ELISA
包被抗原
抗体
酶标记抗体
一)双抗体夹心法
,和待检抗原反应,再加酶标抗体和底物,根据显色反应对抗原进行定性或定量。
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