文档介绍：高效液相色谱法测定炎热清胶囊中栀子苷和黄芩苷的含量
检测波长的选择
通过紫外的全扫描可以看出栀子苷在240 nm左右有最大的紫外吸收,该波长与国家药典中栀子药材“含量测定”项下规定的检测波长238nm[2]相接近,且样品中栀子苷的含量较少,在250 nm以后的高波长紫外吸收很小;黄芩苷在278 nm处有最大的吸收。考虑栀子苷的最大吸收波长240nm为含量测定波长,以提高栀子苷的灵敏度,且黄芩苷在此波长下也能准确的定量
提取溶剂的选择
根据黄芩苷或栀子苷的化学性质,实验中先以甲醇, 70%乙醇和无水乙醇为溶媒,以黄芩苷或栀子苷的提取量为指标进行考察。结果均以甲醇的提取效率最优,故选用甲醇作为提取溶剂。
提取方法的选择
常用的黄芩苷提取方法有回流法与超声波提取法[3,4].据有关研究称[5],超声提取法要优于回流法,故本实验采用超声提取法来对样品进行提取,并对提取时间进行了考察。实验中比较了20分钟,30分钟,40分钟,50分钟,60分钟超声提取法,分别进样比较发现30分钟,40分钟,50分钟提取出的栀子苷和黄芩苷的量大致相同,60分钟时增加不明显,所以选择30分作为提取时间,提高了工作效率
流动相的选择
据有关资料显示,同时检测黄芩苷和栀子苷的常用流动相有:-水-磷酸(47∶53∶0. 2)[8];2. 甲醇-%三***乙酸水溶液(25∶75)[9];***-%磷酸[7];()-甲醇(60:40)[8].通过比较和实验发现当乙***比例大时,保留时间短,分离效果差;而甲醇比例加大,虽分离效果较好,但保留时间过长。最终确定选用第三种方法中的流动相,并采用梯度洗脱程序。试验中根据进样后色谱图的具体情况不断调整流动相中乙***和磷酸水溶液的配比,流动相的流速。经反复比较,得到了正文所述的流动相条件。在此条件下,黄芩苷和栀子苷的分离效果及峰形最好
仪器
色谱仪:Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司) 包括色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18 (150mm× mm,5μm)、二极管阵列检测器、溶剂传输泵,AB204-S分析天平(上海精科天平),DFT-200克手提式高速中药粉碎机(浙江温岭市林大机械有限公司)。超声仪:DL-720D数控超声波清洗器(上海文信仪器有限公司),微孔抽滤:AP-01P RACUUMPUMP(220V,50HZ)。
色谱条件
色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18(×150mm,5µm);填充剂:十八烷基键合硅胶;流动相:(A)乙***-(B)%磷酸水溶液,具体梯度洗脱程序如下表1所示
序号时间(min) A%(乙***) B%(%磷酸) 流速(ml/min)
1 14 86
2 14 86
3 25 75
检测波长为240nm,柱温为30℃,进样量为4µl/针, min,,二者的峰都与共存的其他成分分离良好
样品溶液色谱图
min
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
mAU
0
50
100
150
200
250
A
1
2
栀子苷
黄芩苷
阴性对照(不含栀子)溶液色谱图
min
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
mAU
0
20
40
60
80
100
120
B
2
黄芩苷