文档介绍：第一节基因工程原理
一、基因工程概念:P5
二、基因工程的工具:
1、限制性内切酶
2、DNA连接酶
3、运载体
三、基因工程的一般程序
基因工程的工具
1、限制性内切酶
能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,形成黏性末端或平末端
基因工程的工具
2、DNA连接酶
将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶断开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
基因工程的工具
3、运载体
作为运载体必须具备四个条件:①能在宿主细胞中保存下来并大量复制;②有一个至多个限制酶切位点;③有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌割质粒携带的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。④载体应对受体细胞无害。
常用的运载体主要有质粒(双链环状DNA分子)、噬菌体或某些病毒。
三、基因工程的一般程序
1、目的基因的获取
①从基因文库中获取
②利用PCR(多聚酶链式反应)技术扩增目的基因
目的——获取大量的目的基因;原理——双链DNA的复制;条件——需要DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和酶促反应所需的离子,同时还要控制温度;过程——高温变性、低温复性和中温延伸。③人工合成:如果基因比较小、核苷酸序列已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接合成。
三、基因工程的一般程序
2、重组载体的构建(基因工程的核心)
一个基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
在体外进行
用同一种限制性内切酶切割载体
通过DNA连接酶连接目的基因和载体
三、基因工程的一般程序
3、将目的基因导入受体细胞——转化①导入植物细胞:农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法等;②导入动物细胞:显微注射技术,