文档介绍：实用哺乳动物细胞培养手册
细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,,也可以是细胞群.
科学研究:药物研究开发与基础研究
细胞培养基本条件
合成培养基的主要成分有
液体培养基保存
细胞培养环境
细胞培养无菌操作基本技术
清洗
消毒
细胞培养基
冷冻保存要点
1、实验室设计
细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。
2、常用设施及设备
(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类。
(2)无菌操作间:一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。
(3)操作间:普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物
(4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。
(5)分析间:显微镜、计算机及打印机等。
3、培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶、培养板、培养皿等。常准备量是使用量的三倍。器皿应选择透明度好、无毒、利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种。
(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液、血清等液体,常用规格有500ml、250ml、100ml 等几种。
(2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等几种。
(3)培养皿:用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm 等几种。
(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体。常用1ml 和10ml 两种。短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种。
(5)离心管:离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml 和5ml。
(6)其它:如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等。
5、细胞培养目的与用途
科学研究:药物研究开发与基础研究
1. 药物研究与开发
(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究,中药有效成分筛选与鉴定等.
(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.
(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等.
(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发.
(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体.
基础研究
(1) 药物作用机理
(2) 基因功能
(3) 疾病发生机理
2, 生物制药
(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.
(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素,粒细胞生长因子,胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产
(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等
细胞培养基本条件
1,合适的细胞培养基
合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.
2,优质血清
目前,,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.
3,无菌无毒细胞培养环境
,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物.
4,恒定的细胞生长温度
维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度.
5,合适的气体环境
气体是哺乳动