文档介绍：第八章

基因工程与体外表达
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基因工程是指在体外对DNA分子按照既定的目的和方案,对DNA进行剪切和重新连接,然后把它导入宿主细胞,从而能够扩增有关DNA片段,表达有关基因产物,进行DNA序列分析,基因治疗,研究基因表达的调节因子,以及研究基因的功能等。
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第一节基因克隆的工具酶
一、限制性核酸内切酶
(restriction endonuclease)
从双链DNA内部特异位点识别并且裂解磷酸二酯键。
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1. 限制性核酸内切酶的特点
类型限制性修饰作用识别位点切割位点
Ⅰ型有有特异识别位点下游100到1000bp
Ⅱ型有无特异可知、固定
Ⅲ型有有特异识别位点附近切割DNA,
切割位点很难预测。
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EcoRⅠ E代表Escherichia属
co代表coli 种
R代表RY13株
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通常是4~6个碱基对、具有回文序列(palindrom)的DNA片段,大多数酶是错位切割双链DNA,产生5ˊ或3ˊ黏性末端(sticky end)。
如EcoRⅠ切割后产生5ˊ黏性末端:
5 ́-GAATTC-3’ 5 ́-G AATTC-3 ́
3 ́-CTTAAG-5’ 3 ́-CTTAA G-5 ́
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PstⅠ切割后产生3ˊ黏性末端:
有一些酶沿对称轴切断DNA,产生平端或钝端(Blunt end), 如SmaⅠ:
5 ́-CTGCAG-3 ́ 5 ́-CTGCA G-3 ́
3 ́-GACGTC-5 ́ 3 ́-G ACGTC-5 ́
5 ́-CCCGGG-3 ́ 5 ́-CCC GGG-3 ́
3 ́--5 ́ 3 ́-C-5 ́
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二、其他常用的工具酶
1. DNA聚合酶Ⅰ(DNA polymerase I)

●聚合酶活性
● 3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性
● 5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性
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