文档介绍：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和定量测定
制作人:刘洪庆
单位: 植物生理学教研室
一、实验目的
掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法,加深学生对光合色素的理性、感性认识。
熟练掌握分光光度计的使用原理及其方法
二、实验原理
1. 叶绿体色素提取、分离及理化性质
提取:叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性
--***等有机溶剂提取。
色素分离:纸层析法分离。
荧光现象:观察荧光。
取代反应:
叶绿素中镁可被H+取代而形成褐色去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。
皂化反应:
叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇(甲醇和叶绿醇)和叶绿酸的盐,产生的盐能溶于水--分开叶绿素与类胡萝卜素。
2. 定量测定
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
Ca= - (1)
Cb= - (2)
将Ca与Cb相加即得叶绿素总量(CT):
CT=Ca+Cb=+(3)
或:
CT=(D652×1000)/ (4)
三、实验材料
新鲜的菠菜
四、实验步骤
1. 提取叶绿素
研磨法提取光合色素
材料剪碎
研磨法
加入有机溶剂
研磨、匀浆
过滤
提取液
(2)纸层析分离现象观察
(3)叶绿素荧光现象观察
(4)H+和Cu2+对叶绿素
中Mg2+的取代作用
(5)皂化反应现象观察
绿黄色素分层现象
去镁叶绿素
铜代叶绿素
荧光现象
五、定量测定
(1)定量用叶绿素提取液制备
(2)分光光度计测定
(3)实验数据及其处理
分光光度计测定
六、实验结果观察及计算
(1)实验结果观察描述

(2)计算组织中叶绿体色素含量
(用mg/g鲜重或干重表示)
公式
叶绿体色素含量=
七、思考题
(1)叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰,能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析?为什么?
(2)用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水***等提取植物材料,特别是干材料的叶绿体色素往往效果不佳,原因何在?
(3)研磨提取叶绿素时加入CaCO3. 石英砂各有什么作用?