分子克隆技术.ppt

文档介绍：分子克隆技术
一、什么叫分子克隆
1、什么叫克隆?
克隆(Clone)是指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全一样的子代群体。
子代群体
细胞
分子
植物
动物
分子克隆
如基因(DNA)克隆
细胞克隆
植物克隆
动物克隆
获得克隆的过程叫做克隆技术。
2、细胞克隆
两种方法:
3、基因(DNA)克隆
基因克隆是通过克隆的细胞完成的。
例如,质粒DNA的克隆:
双链环状质粒DNA
大肠杆菌
genome
转化
克隆化
Transfer cells to agar plate for cloning
转化大肠杆菌
培养
提取质粒
克隆质粒
基因(DNA)克隆的主要目的是构建重组DNA(binant DNA)分子。
重组DNA分子通常是将DNA(基因)片段与载体DNA体外连接构建而成的。
Cohesive end cut by restriction enzyme
Cohesive end cut by restriction enzyme
Foreign DNA fragment
plasmid
ligation
Chemeric plasmid
Foreign DNA fragment
重组DNA分子
载体是指能携带外源DN***段进行自我复制的DNA分子。例如,细菌的质粒。
质粒是细菌染色体外能独立复制的双链环状DNA分子。
二、基因克隆的基本程序
Target DNA fragment
RE digestion
Plasmid
RE digestion
Ligation
binant plasmid
Target DNA fragment
Transformation
without vector die
with vector grow
Culture in the medium containing antibiotic
Target DNA fragment
Restriction enzyme
Plasmid
Restriction enzyme
T4 ligase
binant plasmid
Target DNA fragment
PCR
Taq DNA Pol
RT-PCR
RTase
基因克隆需要一些工具酶。
三、基因克隆中的工具酶
常用的工具酶:
限制性内切酶(restriction endonuclease, RE)
DNA连接酶(DNA ligase)
DNA聚合酶(DNA polymerase, DNA pol.)
末端转移酶(Terminal transferase)
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)
(一)限制性内切酶
限制性内切酶(Restriction Endonuclease, RE)是一类能识别和切割双链DNA分子内特定碱基顺序的核酸水解酶。
分三型:
I型限制性内切酶(兼修饰功能,没有固定切点)
II型限制性内切酶(分子生物学常用)
III型限制性内切酶(兼修饰功能)