临床基因扩增检验培训班-PCR污染与预防 PPT课件.ppt

文档介绍：聚合酶链式反应及其污染与预防污染的措施
协和医院
李一荣
临床基因扩增检查验收中存在的问题
5份标本(2份标本小于最低检测限)
检测结果:
(1) 与预期靶值完全符合
(2) 阴性对照出现阳性, 小于最低检测限的标本为阳性
(3) 阳性标本高于预期值2个数量级.
(4)所有阳性标本均低于预期靶值1个及以上数量级.
聚合酶链式反应成功的关键因素
保证标本质量与模板质量
PCR反应体系与反应条件的优化
PCR相关仪器的校准
灵敏度、特异性
批内与批间检测的可重复性
预防污染的发生(假阳性)
Stephen AB et -time reverse transcription PCR (qRT-PCR)
and its potential use in clinical diagnosis. Clinical Science (2005) 109, 365–379
标本质量与模板质量
Real time PCR,2006
认真分析标准曲线观察PCR反应体系与反应条件是否正确
(r2):越接近1越好
(slope):-~
(100%的扩增效率)
(intercept):~
(100%的扩增效率)
Ct=A+Blg[C]
PCR相关仪器的校准
批内与批间检测的可重复性