文档介绍：血清总胆红素和结合胆红素测定
燕德起
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【原理】
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应,产生偶氮胆红素;非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用,其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应,也产生偶氮胆红素。,最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素,在600nm波长比色,使检测灵敏度提高。
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】
-,,乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2),溶于约500ml去离子水中,,搅拌使溶解(加入咖啡因后不能加热溶解),用去离子水补足至1L,混匀。滤纸过滤,置棕色瓶,室温保存。
,酒石酸钠(Na2C4H4O6?2H2O),用去离子水溶解并补足至1L,混匀。置塑料瓶中,室温保存。
,用去离子水溶解并定容至100ml,混匀,置棕色瓶,冰箱保存,稳定期不少于3个月。,冰箱保存,稳定期不少于2周。
(NH2C6H4SO3H?H2O),溶于800ml去离子水中,加入浓盐酸15ml,用去离子水补足至1L。
,混匀即成。
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】

(1) 目前一般用游非结合胆红素配制标准液,此标准品须用含白蛋白的溶剂配制,常用人混合血清,对此血清的要求如下:
收集无溶血、无黄疽、无脂浊的新鲜血清,混合,必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的血清1ml, NaCl溶液24ml,混合。在414nm波长,1cm光径, NaCl溶液调零点,;。
(2) 配制标准液的胆红素须符合下列标准:纯胆红素的氯仿溶液,在25℃条件下,±,波长453nm,摩尔吸光系数应在60 700±1 600范围内;改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74 380±866。
(3) 胆红素标准贮存液(171μmol/L) 准确称取符合要求的胆红素10mg,加入二甲亚砜1ml,用玻璃棒搅拌,使成混悬液。,使胆红素完全溶解后,移入100ml容量瓶中,以稀释用血清洗涤数次并入容量瓶中,,边加边摇(勿用力摇动,以免产生气泡)。最后以稀释用血清定容。配制过程中应尽量避光,贮存容器用黑纸包裹,置4℃冰箱3d内有效,但要求配后尽快作标准曲线。
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【操作步骤】
混匀后,波长600nm,对照管调零,读取吸光度,在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
标准曲线制作
混匀(不可产生气泡),按总胆红素测定法操作。每一浓度作3个平行管,并分别做标准对照管,用各自的标准对照管调零,读取标准管的吸光度。配制标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红素,同样测定后得一吸光度值。每个标准管的吸光度值均应减去此吸光度,然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【临床意义】
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(1) 比值<20% 溶血性黄疸,阵发性血红蛋白尿,恶性贫血,红细胞增多症等。
(2) 比值40%~60% 肝细胞性黄疸。
(3) 比值>60% 阻塞性黄疸。
但以上几类黄疸,尤其是(2)、(3)类之间有重叠。
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改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【注意事项】
,标准液及标本均应尽量避光保存。
,但严重溶血时可使测定结果偏低。其原因是血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素,还可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白而干扰吸光度测定。血脂及脂溶色素对测定有干扰,应尽量取空腹血。
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